Исправление ошибок при репликации

Механизмы исправления ошибок во время репликации ДНК и ее репарация вследствие повреждений на протяжении всего жизненного цикла клетки.

рис.1 Модифицированные азотистые основания ДНК, удаляемые ДНК–гликозилазами: а – урацил; б – гипоксантин; в – 5–гидроксицитозин; г – 2,5-диамино-4-формамидопиримидин; д – 7,8-дигидро-8-оксогуанин; е – мочевина; ж – тимингликоль; з – 5-формилурацил; и – 5-гидроксиметилурацил; к – 3-метиладенин; л – 7-метилгуанин; м – 2-метилцитозин [Партушев, 2000].

АP-эндонуклеаза создает ник (одноцепочечный разрав) с 3’-ОН и 5’-dRP концами. Для большинства млекопитающих характерен
тип BER репарации с включением одного нуклеотида. В этом случае ДНК-полимераза β вставляет 1 нуклеотид в 3’-конец праймера и затем удаляет 5’-dRP фрагмент с помощью своей dRP-лиазной активности. Получившийся ник сшивается ДНК-лигазой. Альтернативным является путь так называемой длинно-заплаточной BER репарации. Он реализуется в тех случаях, когда 5’-dRP фрагмент модифицирован и не может быть удален с помощью ДНК–полимеразы β. В этом случае Pol β проводит синтез ДНК с вытеснением запирающей цепи, 2 — 13 нуклеотидов. Образующийся в результате свисающий 5’-конец ДНК выщепляется флэпэндонуклеазой FEN1. Pol бета, Pol дельтаи Pol епсилон могут вести ситнез ДНК во время длинно-заплаточной репарации. Идентичность полимераз, вовлеченных в этот процесс in vitro, еще не ясна, но показано, что Pol β всегда инициирует синтез ДНК.
Зависимость того, какой из путей BER реализуется, определяется бифункциональными ДНК-гликозилазами, которые имеют дополнительную
АP-лиазную активность. При комбинации ДНК-гликозилазной, АP-лиазной и АP-эндонуклеазной активностей внутри одного фермента в поврежденной цепи ДНК образуется однонуклеотидная брешь с 3’-ОН и 5’-P концами, которую может застроить Pol β.
Дополнительная сложность в понимании механизмов переключения внутри BER состоит в том, что две новые полимеразы Pol i и Pol лямбда также имеют dRP-лиазнуюактивность. Таким образом, можно предположить, что они, как и Pol бета, являются участниками тех процессов репарации, где необходимо выщепление dRP фрагмента. Pol лямбда является близким гомологом Pol бета со сходными ферментативными свойствами. Также как и Pol бета, она лишена 3’—>5’экзонуклеазной активности и имеет низкую процессивность синтеза на частичном ДНК-дуплексе, содержащем свисающий 5’-участок матрицы, процессивный синтез возможен в брешах с 5’-P концами. Таким образом, Pol лямбда является подходящим кандидатом для BER синтеза. Более того,
Pol лямбда заменяет Pol бета в реконструированных BER системах, репарирующих урацил-содержащие ДНК, iv vitro. Однако, клетки мышей Pol лямбда -/- не чувствительны к обработке перекисью или метилметансульфонатом, агентам, которые, помимо других типов повреждений, продуцируют АР-сайты и окисленные формы оснований. Отсюда можно заключить, что Pol лямбда не является необходимой для BER в клетках, где есть, Pol дельта и Pol епсилон. Интересно, что Pol лямбда может эффективно процессировать ДНК при очень низкой концентрации dNTP (около 1 мкМ), что может означать ее участие в любых клеточных процессах в фазе G0 при низкой концентрации dNTP. В поддержку этой гипотезы выступает тот факт, что экспрессия Pol лямбда зависит от клеточного цикла, и наибольшее количества белка экспрессируется при переходе из S- в М-фазу и в спокойных клетках.
Pol i принадлежит к Y семейству полимераз. Основная функция полимераз этого семейства – утилизация ДНК-повреждений, блокирующих работу репликативных ДНК-полимераз. Однако,
исходя из некоторых свойств Pol i, можно предположить, что этот фермент является участником альтернативного процесса BER репарации. Pol i обладает низкой поцессивностью, лишена 3’>5’экзонуклеазной активности и способна застраивать брешь в 1 — 5 нуклеотидов iv vitro. Pol i может замещать Pol бета в реконструированных системах BER, репарирующих урацил-содержащие ДНК, iv vitro, благодаря наличию dRP-лиазной и ДНК-полимеразной активностей. Кинетические исследования реакции нуклеотидного встраивания овыявили дополнительные данные, свидетельствующие в пользу того, что Pol i может принимать участие в репарации. Pol i вставляет dTMP напротив А в ДНК-матрицу с большей эффективностью, чем любой другой дезоксинуклеозидмонофосфат, при этом точность ДНК-синтеза сопоставима с параметрами для Pol бета. Основываясь на этих данных, можно предположить, что Pol i – участник BER репарации оснований уридина, который образуется после встраивания dUMP напротив А во время ошибочной репликации. Pol i также
может вставлять dGМP напротив Т со скоростями, близкими к скорости включения корректного нуклеотида. Более того, на матрице, содержащей 2 или более последовательных Т, вторым встраиваемым нуклеотидом оказался dGMP. Подобные результаты служат основой для гипотезы, что Pol i может быть участником альтернативной BER репарации в тех слсучаях, когда dG был ошибочно удален гликозилазой из G-T или G-U некомплементарной пары, образовавшейся в результате дезаминации 5-метилцитозина или цитозина. Возможная роль Pol i в трансляции синтеза ДНК и процессе соматических гипермутаций рассмотрена ниже.
Возможность участия пяти ядерных полимераз в BER, три из которых обладают dRP-лиазной активностью, была мало изучена в клетках и на модельных животных, лишенных более чем одной полимеразы. Поэтому данные о субстратной специфичности и взаимодействии полимеразо-акцепторных белков, необходимых в BER, недостаточны. Помимо BER репарации, Pol бетта принимает участие в репарации одноцепочечных разрывов; функционирование
этого процесса нарушено у пациентов с наследственной спинномозговой атаксией. Одноцепочечные разрывы генерируются эндогенными или экзогенными агентами. Такие разрывы часто содержат однонуклеотидные бреши с 3’ и/или 5’ модифицированными концами, то есть очень похожи на субстраты BER. Так вот, интересно посмотреть, способны ли другие полимеразы с подобным набором исходных данных (Pol i и Pol лямбда) принимать участие в репарации одноцепочечных разрывов.
Четвертой ДНК-полимеразой в клетках человека, обладающей dRP-лиазной активностью, является митохондриальная ДНК-полимераза гамма. Pol гамма – единственная ДНК-полимераза, обнаруженная в митохондриях, следовательно, она ответственна за все преобразованиях ДНК, происходящие в этой органелле. Митохондрия является объектом интенсивного повреждения ДНК активными формами кислорода, генерируемыми во время окислительного фосфорилирования. Эти повреждения эффективно репарируются набором митохондриальных белков, которые включают в себя АP-эндонуклеазу, Pol гамма,
мтДНК-лигазу. Сам процесс репарации сходен с однонуклеотидным процессом BER в ядерной ДНК.

Таблица. ДНК-гликозилазы и эндонуклеазы клеток микроорганизмов и человека, участвующие в BER.

В универсальном механизме эксцизионной репарации как прокариоты, так и эукариоты гидролизуют 3–5-ю фосфодиэфирную связь с 3′-конца отповреждения. При этом прокариоты гидролизуют также 8-ю связьот 5’-конца измененного нуклеотида, тогда как у эукариотических организмовпроисходит одноцепочечный разрыв на расстоянии 21–25 нуклеотидов отповреждения со стороны его 5’-конца. Таким образом, прокариоты удаляютизмененный нуклеотид в составе 12–13-членных олигомеров, тогда как
эукариоты – в составе одноцепочечных фрагментов ДНК длиной в 27–29 нуклеотидов. Ферментная система, вносящая такие двойные одноцепочечные
разрывы, получила название эксцизионной нуклеазы (эксцинуклеазы). Образующаяся в молекуле репарируемой ДНК одноцепочечная брешь далее заполняется с помощью ДНК-полимеразы, а фосфодиэфирная связь в остающемся одноцепочечном разрыве восстанавливается ДНК-лигазой.

NER устраняет ДНК-повреждения посредством вырезания олигонуклеотида, содержащего это повреждение, с образованием бреши в ДНК размером ~ 30 нуклеотидов. Эта брешь застраивается одной или двумя полимеразами В семейства Pol дельта или Pol епсилон. Любая из этих ДНК-полимераз способна застраивать подобную брешь в реконструированной системе, содержащей очищенные белки млекопитающих, in vitro. При изучении NER в системе фибробластов человека с нарушенной проницаемостью и в ядерном экстракте HeLa клеток обнаружили, что обе полимеразы необходимы для восстановления ДНК после УФ-облучения. Исследования
в дрожжевых системах показали, что та или другая ДНК-полимераза существенно дополняют репарацию УФ-поврежденной ДНК. Более поздние исследования показали, что оба фермента необходимы для эффективной NER репарации в дрожжевых экстрактах. Pol дельта и Pol епсилон способны вести процессивный синтез ДНК при наличии дополнительного фактора PCNA, который «надевается» на ДНК с помощью пятисубъединичного комплекса RFC. Репарационный синтез как Pol дельта, так и Pol епсилон также требует присутствия этих факторов процессивности.

Один из механизмов Active Directory (AD), с которым могут быть связаны всевозможные затруднения, это репликация. Репликация – критически важный процесс в работе одного или более доменов или контроллеров домена (DC), и не важно, находятся они на одном сайте или на разных. Неполадки с репликацией могут привести к проблемам с аутентификацией и доступом к сетевым ресурсам. Обновления объектов AD реплицируются на контроллеры домена, чтобы все разделы были синхронизированы. В крупных компаниях использование большого количества доменов и сайтов – обычное дело. Репликация должна происходить внутри локального сайта, так же как дополнительные сайты должны сохранять данные домена и леса между всеми DC.

В этой статье речь пойдет о методах выявления проблем с репликацией в AD. Кроме того, я покажу, как находить и устранять неисправности и работать с четырьмя наиболее распространенными ошибками репликации AD:

• Error 2146893022 (главное конечное имя неверно);
• Error 1908 (не удалось найти контроллер домена);
• Error 8606 (недостаточно атрибутов для создания объекта);
• Error 8453 (доступ к репликации отвергнут).

Вы также узнаете, как анализировать метаданные репликации с помощью таких инструментов, как AD Replication Status Tool, встроенная утилита командной строки RepAdmin.exe и Windows PowerShell.

Для всестороннего рассмотрения я буду использовать лес Contoso, который показан на рисунке. В таблице 1 перечислены роли, IP-адреса и настройки DNS-клиента для компьютеров данного леса.

Рисунок. Архитектура леса

Для обнаружения неполадок с репликацией AD запустите AD Replication Status Tool на рабочей станции администратора в корневом домене леса. Например, вы открываете этот инструмент из системы Win8Client, а затем нажимаете кнопку Refresh Replication Status для уверенности в четкой коммуникации со всеми контроллерами домена. В таблице Discovery Missing Domain Controllers на странице Configuration/Scope Settings инструмента можно увидеть два недостающих контроллера домена, как показано на экране 1.

Экран 1. Два недостающих контроллера домена

В таблице Replication Status Collection Details вы можете проследить статус репликации контроллеров домена, которые никуда не пропадали, как показано на экране 2.

Экран 2. Статус репликации контроллеров домена

Пройдя на страницу Replication Status Viewer, вы обнаружите некоторые ошибки в репликации. На экране 3 видно, что возникает немалое число ошибок репликации, возникающих в лесу Contoso. Из пяти контроллеров домена два не могут видеть другие DC, а это означает, что репликация не будет происходить на контроллерах домена, которые не видны. Таким образом, пользователи, подключающиеся к дочерним DC, не будут иметь доступ к самой последней информации, что может привести к проблемам.

Экран 3. Ошибки репликации, возникающие в лесу Contoso

Поскольку ошибки репликации все же возникают, полезно задействовать утилиту командной строки RepAdmin.exe, которая помогает получить отчет о состоянии репликации по всему лесу. Чтобы создать файл, запустите следующую команду из Cmd.exe:

Repadmin /showrel * /csv > ShowRepl.csv

Проблема с двумя DC осталась, соответственно вы увидите два вхождения LDAP error 81 (Server Down) Win32 Err 58 на экране, когда будет выполняться команда. Мы разберемся с этими ошибками чуть позже. А теперь откройте ShowRepl.csv в Excel и выполните следующие шаги:

1. Из меню Home щелкните Format as table и выберите один из стилей.
2. Удерживая нажатой клавишу Ctrl, щелкните столбцы A (Showrepl_COLUMNS) и G (Transport Type). Правой кнопкой мыши щелкните в этих столбцах и выберите Hide.
3. Уменьшите ширину остальных столбцов так, чтобы был виден столбец K (Last Failure Status).
4. Для столбца I (Last Failure Time) нажмите стрелку вниз и отмените выбор 0.
5. Посмотрите на дату в столбце J (Last Success Time). Это последнее время успешной репликации.
6. Посмотрите на ошибки в столбце K (Last Failure Status). Вы увидите те же ошибки, что и в AD Replication Status Tool.

Таким же образом вы можете запустить средство RepAdmin.exe из PowerShell. Для этого сделайте следующее:

1. Перейдите к приглашению PowerShell и введите команду

Repadmin /showrepl * /csv | ConvertFrom-Csv | Out-GridView

2. В появившейся сетке выберите Add Criteria, затем Last Failure Status и нажмите Add.

3. Выберите подчеркнутое слово голубого цвета contains в фильтре и укажите does not equal.

4. Как показано на экране 4, введите 0 в поле, так, чтобы отфильтровывалось все со значением 0 (успех) и отображались только ошибки.

Экран 4. Задание фильтра

Теперь, когда вы знаете, как проверять статус репликации и обнаруживать ошибки, давайте посмотрим, как выявлять и устранять четыре наиболее распространенные неисправности.

Исправление ошибки AD Replication Error -2146893022

Итак, начнем с устранения ошибки -2146893022, возникающей между DC2 и DC1. Из DC1 запустите команду Repadmin для проверки статуса репликации DC2:

Repadmin /showrepl dc2

На экране 5 показаны результаты, свидетельствующие о том, что репликация перестала выполняться, поскольку возникла проблема с DC2: целевое основное имя неверно. Тем не менее, описание ошибки может указать ложный путь, поэтому приготовьтесь копать глубже.

Экран 5. Проблема с DC2 — целевое основное имя неверно

Во-первых, следует определить, есть ли базовое подключение LDAP между системами. Для этого запустите следующую команду из DC2:

Repadmin /bind DC1

На экране 5 видно, что вы получаете сообщение об ошибке LDAP. Далее попробуйте инициировать репликацию AD с DC2 на DC1:

Repadmin /replicate dc2 dc1 «dc=root,dc=contoso,dc=com»

И на этот раз отображается та же ошибка с главным именем, как показано на экране 5. Если открыть окно Event Viewer на DC2, вы увидите событие с Event ID 4 (см. экран 6).

Экран 6. Сообщение о событии с Event ID 4

Выделенный текст в событии указывает на причину ошибки. Это означает, что пароль учетной записи компьютера DC1 отличается от пароля, который хранится в AD для DC1 в Центре распределения ключей – Key Distribution Center (KDC), который в данном случае запущен на DC2. Значит, следующая наша задача – определить, соответствует ли пароль учетной записи компьютера DC1 тому, что хранится на DC2. В командной строке на DC1 введите две команды:

Repadmin /showobjmeta dc1 «cn=dc1,ou=domain controllers,

dc=root,dc=contoso,dc=com» > dc1objmeta1.txt

Repadmin /showobjmeta dc2 «cn=dc1,ou=domain controllers,

dc=root,dc=contoso,dc=com» > dc1objmeta2.txt

Далее откройте файлы dc1objmeta1.txt и dc1objmeta2.txt, которые были созданы, и посмотрите на различия версий для dBCSPwd, UnicodePWD, NtPwdHistory, PwdLastSet и lmPwdHistory. В нашем случае файл dc1objmeta1.txt показывает версию 19, тогда как версия в файле dc1objmeta2.txt – 11. Таким образом, сравнивая эти два файла, мы видим, что DC2 содержит информацию о старом пароле для DC1. Операция Kerberos не удалась, потому что DC1 не смог расшифровать билет службы, представленный DC2.

KDC, запущенный на DC2, не может быть использован для Kerberos вместе с DC1, так как DC2 содержит информацию о старом пароле. Чтобы решить эту проблему, вы должны заставить DC2 использовать KDC на DC1, чтобы завершить репликацию. Для этого вам, в первую очередь, необходимо остановить службу KDC на DC2:

Net stop kdc

Теперь требуется начать репликацию корневого раздела Root:

Repadmin /replicate dc2 dc1 «dc=root,dc=contoso,dc=com»

Следующим вашим шагом будет запуск двух команд Repadmin /showobjmeta снова, чтобы убедиться в том, что версии совпадают. Если все хорошо, вы можете перезапустить службу KDC:

Net start kdc

Обнаружение и устранение ошибки AD Replication Error 1908

Теперь, когда мы устранили ошибку -2146893022, давайте перейдем к ошибке репликации AD 1908, где DC1, DC2 и TRDC1 так и не удалось выполнить репликацию из ChildDC1. Решить проблему можно следующим образом. Используйте Nltest.exe для создания файла Netlogon.log, чтобы выявить причину ошибки 1908. Прежде всего, включите расширенную регистрацию на DC1, запустив команду:

Nltest /dbflag:2080fff

Теперь, когда расширенная регистрация включена, запустите репликацию между DC – так все ошибки будут зарегистрированы. Этот шаг поможет запустить три команды для воспроизведения ошибок. Итак, во-первых, запустите следующую команду на DC1:

Repadmin /replicate dc1 childdc1 dc=child,dc=root,
dc=contoso,dc=com

Результат, показанный на экране 7, говорит о том, что репликация не состоялась, потому что DC домена не может быть найден.

Экран 7. Репликация не состоялась, потому что DC домена не может быть найден

Во-вторых, из DC1 попробуйте определить местоположение KDC в домене child.root.contoso.com с помощью команды:

Nltest /dsgetdc:child /kdc

Результаты на экране 7 свидетельствуют, что такого домена нет. В-третьих, поскольку вы не можете найти KDC, попытайтесь установить связь с любым DC в дочернем домене, используя команду:

Nltest /dsgetdc:child

В очередной раз результаты говорят о том, что нет такого домена, как показано на экране 7.

Теперь, когда вы воспроизвели все ошибки, просмотрите файл Netlogon.log, созданный в папке C:Windowsdebug. Откройте его в «Блокноте» и найдите запись, которая начинается с DSGetDcName function called. Обратите внимание, что записей с таким вызовом будет несколько. Вам нужно найти запись, имеющую те же параметры, что вы указали в команде Nltest (Dom:child и Flags:KDC). Запись, которую вы ищете, будет выглядеть так:

DSGetDcName function called: client PID=2176,
Dom:child Acct:(null) Flags:KDC

Вы должны просмотреть начальную запись, равно как и последующие, в этом потоке. В таблице 2 представлен пример потока 3372. Из этой таблицы следует, что поиск DNS записи KDC SRV в дочернем домене был неудачным. Ошибка 1355 указывает, что заданный домен либо не существует, либо к нему невозможно подключиться.

Поскольку вы пытаетесь подключиться к Child.root.contoso.com, следующий ваш шаг – выполнить для него команду ping из DC1. Скорее всего, вы получите сообщение о том, что хост не найден. Информация из файла Netlogon.log и ping-тест указывают на возможные проблемы в делегировании DNS. Свои подозрения вы можете проверить, сделав тест делегирования DNS. Для этого выполните следующую команду на DC1:

Dcdiag /test:dns /dnsdelegation > Dnstest.txt

На экране 8 показан пример файла Dnstest.txt. Как вы можете заметить, это проблема DNS. Считается, что IP-адрес 192.168.10.1 – адрес для DC1.

Экран 8. Пример файла Dnstest.txt

Чтобы устранить проблему DNS, сделайте следующее:

1. На DC1 откройте консоль управления DNS.

2. Разверните Forward Lookup Zones, разверните root.contoso.com и выберите child.

3. Щелкните правой кнопкой мыши (как в родительской папке) на записи Name Server и выберите пункт Properties.

4. Выберите lamedc1.child.contoso.com и нажмите кнопку Remove.

5. Выберите Add, чтобы можно было добавить дочерний домен сервера DNS в настройки делегирования.

6. В окне Server fully qualified domain name (FQDN) введите правильный сервер childdc1.child.root.contoso.com.

7. В окне IP Addresses of this NS record введите правильный IP-адрес 192.168.10.11.

8. Дважды нажмите кнопку OK.

9. Выберите Yes в диалоговом окне, где спрашивается, хотите ли вы удалить связующую запись (glue record) lamedc1.child.contoso.com [192.168.10.1]. Glue record – это запись DNS для полномочного сервера доменных имен для делегированной зоны.

10. Используйте Nltest.exe для проверки, что вы можете найти KDC в дочернем домене. Примените опцию /force, чтобы кэш Netlogon не использовался:

Nltest /dsgetdc:child /kdc /force

11. Протестируйте репликацию AD из ChildDC1 на DC1 и DC2. Это можно сделать двумя способами. Один из них – выполнить команду

Repadmin /replicate dc1 childdc1 «dc=child,dc=root,
dc=contoso,dc=com»

Другой подход заключается в использовании оснастки Active Directory Sites и Services консоли Microsoft Management Console (MMC), в этом случае правой кнопкой мыши щелкните DC и выберите Replicate Now, как показано на экране 9. Вам нужно это сделать для DC1, DC2 и TRDC1.

Экран 9. Использование оснастки Active Directory Sites и?Services

После этого вы увидите диалоговое окно, как показано на экране 10. Не учитывайте его, нажмите OK. Я вкратце расскажу об этой ошибке.

Экран 10. Ошибка при репликации

Когда все шаги выполнены, вернитесь к AD Replication Status Tool и обновите статус репликации на уровне леса. Ошибки 1908 больше быть не должно. Ошибка, которую вы видите, это ошибка 8606 (недостаточно атрибутов для создания объекта), как отмечалось на экране 10. Это следующая трудность, которую нужно преодолеть.

Устранение ошибки AD Replication Error 8606

Устаревший объект (lingering object) – это объект, который присутствует на DC, но был удален на одном или нескольких других DC. Ошибка репликации AD 8606 и ошибка 1988 в событиях Directory Service – хорошие индикаторы устаревших объектов. Важно учитывать, что можно успешно завершить репликацию AD и не регистрировать ошибку с DC, содержащего устаревшие объекты, поскольку репликация основана на изменениях. Если объекты не изменяются, то реплицировать их не нужно. По этой причине, выполняя очистку устаревших объектов, вы допускаете, что они есть у всех DC (а не только DCs logging errors).

Чтобы устранить проблему, в первую очередь убедитесь в наличии ошибки, выполнив следующую команду Repadmin на DC1:

Repadmin /replicate dc1 dc2 «dc=root,dc=contoso,dc=com»

Вы увидите сообщение об ошибке, как показано на экране 11. Кроме того, вы увидите событие с кодом в Event Viewer DC1 (см. экран 12). Обратите внимание, что событие с кодом 1988 только дает отчет о первом устаревшем объекте, который вам вдруг встретился. Обычно таких объектов много.

Экран 11. Ошибка из-за наличия устаревшего объекта

Экран 12. Событие с кодом 1988

Вы должны скопировать три пункта из информации об ошибке 1988 в событиях: идентификатор globally unique identifier (GUID) устаревшего объекта, сервер-источник (source DC), а также уникальное, или различающееся, имя раздела – distinguished name (DN). Эта информация позволит определить, какой DC имеет данный объект.

Прежде всего, используйте GUID объекта (в данном случае 5ca6ebca-d34c-4f60-b79c-e8bd5af127d8) в следующей команде Repadmin, которая отправляет результаты в файл Objects.txt:

Repadmin /showobjmeta * «e8bd5af127d8>» > Objects.txt

Если вы откроете файл Objects.txt, то увидите, что любой DC, который возвращает метаданные репликации для данного объекта, содержит один или более устаревших объектов. DC, не имеющие копии этого объекта, сообщают статус 8439 (уникальное имя distinguished name, указанное для этой операции репликации, недействительно).

Затем вам нужно, используя GUID объект Directory System Agent (DSA) DC1, идентифицировать все устаревшие объекты в разделе Root на DC2. DSA предоставляет доступ к физическому хранилищу информации каталога, находящейся на жестком диске. В AD DSA – часть процесса Local Security Authority. Для этого выполните команду:

Repadmin /showrepl DC1 > Showrepl.txt

В Showrepl.txt GUID объект DSA DC1 появляется вверху файла и выглядит следующим образом:

DSA object GUID: 70ff33ce-2f41-4bf4-b7ca-7fa71d4ca13e

Ориентируясь на эту информацию, вы можете применить следующую команду, чтобы удостовериться в существовании устаревших объектов на DC2, сравнив его копию раздела Root с разделом Root DC1.

Repadmin /removelingeringobjects DC2 70ff33ce-2f41-4bf4-
b7ca-7fa71d4ca13e «dc=root,dc=contoso,dc=com»
/Advisory_mode

Далее вы можете просмотреть журнал регистрации событий Directory Service на DC2, чтобы узнать, есть ли еще какие-нибудь устаревшие объекты. Если да, то о каждом будет сообщаться в записи события 1946. Общее число устаревших объектов для проверенного раздела будет отмечено в записи события 1942.

Вы можете удалить устаревшие объекты несколькими способами. Предпочтительно использовать ReplDiag.exe. В качестве альтернативы вы можете выбрать RepAdmin.exe.

Используем ReplDiag.exe. С вашей рабочей станции администратора в корневом домене леса, а в нашем случае это Win8Client, вы должны выполнить следующие команды:

Repldiag /removelingeringobjects
Repadmin /replicate dc1 dc2 «dc=root,dc=contoso,dc=com»

Первая команда удаляет объекты. Вторая команда служит для проверки успешного завершения репликации (иными словами, ошибка 8606 больше не регистрируется). Возвращая команды Repadmin /showobjmeta, вы можете убедиться в том, что объект был удален из всех, что объект был удален DC. Если у вас есть контроллер только для чтения read-only domain controller (RODC) и он содержал данный устаревший объект, вы заметите, что он все еще там находится. Дело в том, что текущая версия ReplDiag.exe не удаляет объекты из RODC. Для очистки RODC (в нашем случае, ChildDC2) выполните команду:

Repadmin /removelingeringobjects childdc2.child.root.
contoso.com 70ff33ce-2f41-4bf4-b7ca-7fa71d4ca13e
«dc=root,dc=contoso,dc=com» /Advisory_mode

После этого просмотрите журнал событий Directory Service на ChildDC2 и найдите событие с кодом 1939. На экране 13 вы видите уведомление о том, что устаревшие объекты были удалены.

Экран 13. Сообщение об удалении устаревших объектов

Используем RepAdmin.exe. Другой способ, позволяющий удалить устаревшие объекты – прибегнуть к помощи RepAdmin.exe. Сначала вы должны удалить устаревшие объекты главных контроллеров домена (reference DC) с помощью кода, который видите в листинге 1. После этого необходимо удалить устаревшие объекты из всех остальных контроллеров домена (устаревшие объекты могут быть показаны или на них могут обнаружиться ссылки на нескольких контроллерах домена, поэтому убедитесь, что вы удалили их все). Необходимые для этой цели команды приведены в листинге 2.

Как видите, использовать ReplDiag.exe гораздо проще, чем RepAdmin.exe, поскольку вводить команд вам придется намного меньше. Ведь чем больше команд, тем больше шансов сделать опечатку, пропустить команду или допустить ошибку в командной строке.

Устранение ошибки AD Replication Error 8453

Предыдущие ошибки репликации AD были связаны с невозможностью найти другие контроллеры домена. Ошибка репликации AD с кодом состояния 8453 возникает, когда контроллер домена видит другие DC, но не может установить с ними связи репликации.

Например, предположим, что ChildDC2 (RODC) в дочернем домене не уведомляет о себе как о сервере глобального каталога – Global Catalog (GC). Для получения статуса ChildDC2 запустите следующие команды на ChildDC2:

Repadmin /showrepl childdc2 > Repl.txt

Данная команда отправляет результаты Repl.txt. Если вы откроете этот текстовый файл, то увидите вверху следующее:

BoulderChildDC2
DSA Options: IS_GC DISABLE_OUTBOUND_REPL IS_RODC
WARNING: Not advertising as a global catalog

Если вы внимательно посмотрите на раздел Inbound Neighbors, то увидите, что раздел DC=treeroot,DC=fabrikam,DC=com отсутствует, потому что он не реплицируется. Взгляните на кнопку файла – вы увидите ошибку:

Source: BoulderTRDC1
******* 1 CONSECTUTIVE FAILURES since 2014-01-12 11:24:30
Last error: 8453 (0x2105):
Replication access was denied
Naming Context: DC=treeroot,DC=fabrikam,DC=com

Эта ошибка означает, что ChildDC2 не может добавить связь репликации (replication link) для раздела Treeroot. Как показано на экране 14, данная ошибка также записывается в журнал регистрации событий Directory Services на ChildDC2 как событие с кодом 1926.

Экран 14. Отсутствие связи репликации

Здесь вам нужно проверить, нет ли проблем, связанных с безопасностью. Для этого используйте DCDiag.exe:

Dcdiag /test:checksecurityerror

На экране 15 показан фрагмент вывода DCDiag.exe.

Экран 15. Фрагмент вывода DCDiag.exe

Как видите, вы получаете ошибку 8453, потому что группа безопасности Enterprise Read-Only Domain Controllers не имеет разрешения Replicating Directory Changes.

Чтобы решить проблему, вам нужно добавить отсутствующую запись контроля доступа – missing access control entry (ACE) в раздел Treeroot. В этом вам помогут следующие шаги:

1. На TRDC1 откройте оснастку ADSI Edit.

2. Правой кнопкой мыши щелкните DC=treeroot,DC=fabrikam,DC=com и выберите Properties.

3. Выберите вкладку Security.

4. Посмотрите разрешения на этот раздел. Отметьте, что нет записей для группы безопасности Enterprise Read-Only Domain Controllers.

5. Нажмите Add.

6. В окне Enter the object names to select наберите ROOTEnterprise Read-Only Domain Controllers.

7. Нажмите кнопку Check Names, затем выберите OK, если указатель объектов (object picker) разрешает имя.

8. В диалоговом окне Permissions для Enterprise Read-Only Domain Controllers снимите флажки Allow для следующих разрешений

*Read

*Read domain password & lockout policies («Чтение политики блокировки и пароля домена»)

*Read Other domain parameters

9. Выберите флажок Allow для разрешения Replicating Directory Changes, как показано на экране 16. Нажмите OK.

10. Вручную запустите Knowledge Consistency Checker (KCC), чтобы немедленно сделать перерасчет топологии входящей репликации на ChildDC2, выполнив команду

Repadmin /kcc childdc2

Экран 16. Включение разрешения Replicating Directory Change

Данная команда заставляет KCC на каждом целевом сервере DC незамедлительно делать перерасчет топологии входящей репликации, добавляя снова раздел Treeroot.

Состояние репликации критически важно

Репликация во всех отношениях в лесу AD имеет решающее значение. Следует регулярно проводить ее диагностику, чтобы изменения были видны всем контроллерам домена, иначе могут возникать различные проблемы, в том числе связанные с аутентификацией. Проблемы репликации нельзя обнаружить сразу. Поэтому если вы пренебрегаете мониторингом репликации (в крайнем случае, периодически делайте проверку), то рискуете столкнуться с трудностями в самый неподходящий момент. Моей задачей было показать вам, как проверять статус репликации, обнаруживать ошибки и в то же время как справиться с четырьмя типичными проблемами репликации AD.

REM Команды для удаления устаревших объектов
REM из раздела Configuration.
Repadmin /removelingeringobjects childdc1.child.root.
contoso.com 70ff33ce-2f41-4bf4-b7ca-7fa71d4ca13e
«cn=configuration,dc=root,dc=contoso,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects childdc1.child.root.
contoso.com 3fe45b7f-e6b1-42b1-bcf4-2561c38cc3a6
«cn=configuration,dc=root,dc=contoso,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects childdc1.child.root.
contoso.com 0b457f73-96a4-429b-ba81-1a3e0f51c848
«cn=configuration,dc=root,dc=contoso,dc=com»
REM Команды для удаления устаревших объектов
REM из раздела ForestDNSZones.
Repadmin /removelingeringobjects childdc1.child.root.
contoso.com 70ff33ce-2f41-4bf4-b7ca-7fa71d4ca13e
«dc=forestdnszones,dc=root,dc=contoso,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects childdc1.child.root.
contoso.com 3fe45b7f-e6b1-42b1-bcf4-2561c38cc3a6
«dc=forestdnszones,dc=root,dc=contoso,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects childdc1.child.
root.contoso.com 0b457f73-96a4-429b-ba81-
1a3e0f51c848 «dc=forestdnszones,dc=root,
dc=contoso,dc=com»
REM Команды для удаления устаревших объектов
REM из раздела домена Root.
Repadmin /removelingeringobjects dc1.root.
contoso.com 3fe45b7f-e6b1-42b1-bcf4-2561c38cc3a6
«dc=root,dc=contoso,dc=com»
REM Команды для удаления устаревших объектов
REM из раздела DomainDNSZones.
Repadmin /removelingeringobjects dc1.root.
contoso.com 3fe45b7f-e6b1-42b1-bcf4-2561c38cc3a6
«dc=root,dc=contoso,dc=com»

REM Команды для удаления устаревших объектов
REM из раздела Configuration.
Repadmin /removelingeringobjects dc1.root.
contoso.com 0c559ee4-0adc-42a7-8668-e34480f9e604
«cn=configuration,dc=root,dc=contoso,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects dc2.root.
contoso.com 0c559ee4-0adc-42a7-8668-e34480f9e604
«cn=configuration,dc=root,dc=contoso,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects childdc2.child.root.
contoso.com 0b457f73-96a4-429b-ba81-1a3e0f51c848
«cn=configuration,dc=root,dc=contoso,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects trdc1.treeroot.
fabrikam.com 0c559ee4-0adc-42a7-8668-e34480f9e604
«cn=configuration,dc=root,dc=contoso,dc=com»
REM Команды для удаления устаревших объектов
REM из раздела ForestDNSZones.
Repadmin /removelingeringobjects dc1.root.contoso.
com 0c559ee4-0adc-42a7-8668-e34480f9e604
«dc=forestdnszones,dc=root,dc=contoso,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects dc2.root.contoso.
com 0c559ee4-0adc-42a7-8668-e34480f9e604
«dc=forestdnszones,dc=root,dc=contoso,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects childdc2.child.root.
contoso.com 0b457f73-96a4-429b-ba81-1a3e0f51c848
«dc=forestdnszones,dc=root,dc=contoso,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects trdc1.treeroot.
fabrikam.com 0c559ee4-0adc-42a7-8668-e34480f9e604
«dc=forestdnszones,dc=root,dc=contoso,dc=com»
REM Команды для удаления устаревших объектов
REM из раздела DomainDNSZones–Root.
Repadmin /removelingeringobjects dc2.child.root.
contoso.com 70ff33ce-2f41-4bf4-b7ca-7fa71d4ca13e
«dc=domaindnszones,dc=root,dc=contoso,dc=com»
REM Команды для удаления устаревших объектов
REM из раздела домена Child.
Repadmin /removelingeringobjects dc1.root.contoso.
com 0c559ee4-0adc-42a7-8668-e34480f9e604
«dc=child,dc=root,dc=contoso,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects dc2.root.contoso.
com 0c559ee4-0adc-42a7-8668-e34480f9e604
«dc=child,dc=root,dc=contoso,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects childdc2.child.root.
contoso.com 0b457f73-96a4-429b-ba81-1a3e0f51c848
«dc=child,dc=root,dc=contoso,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects trdc1.treeroot.
fabrikam.com 0c559ee4-0adc-42a7-8668-e34480f9e604
«dc=child,dc=root,dc=contoso,dc=com»
REM Команды для удаления устаревших объектов
REM из раздела DomainDNSZones-Child.
Repadmin /removelingeringobjects childdc2.child.root.
contoso.com 0c559ee4-0adc-42a7-8668-e34480f9e604
«dc=domaindnszones,dc=child,dc=root,dc=contoso,dc=com»
REM Команды для удаления устаревших объектов
REM из раздела домена TreeRoot.
Repadmin /removelingeringobjects childdc1.child.root.
contoso.com 0b457f73-96a4-429b-ba81-1a3e0f51c848
«dc=treeroot,dc=fabrikam,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects childdc2.child.root.
contoso.com 0b457f73-96a4-429b-ba81-1a3e0f51c848
«dc=treeroot,dc=fabrikam,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects dc1.root.contoso.com
0b457f73-96a4-429b-ba81-1a3e0f51c848
«dc=treeroot,dc=fabrikam,dc=com»
Repadmin /removelingeringobjects dc2.root.contoso.com
0b457f73-96a4-429b-ba81-1a3e0f51c848
«dc=treeroot,dc=fabrikam,dc=com»

Макеты страниц

    Исправление ошибок. ДНК-полимеразы могут выявлять и исправлять ошибки, тогда как РНК-полимеразы такой способностью, по-видимому, не обладают. Поскольку ошибка даже в одном основании как при репликации, так и при транскрипции может привести к ошибке в синтезе белка, можете ли вы дать биологическое объяснение этому поразительному различию  [c.925]

    З-Ю п. н. Оказывается, у всех организмов точность работы репликативной машины (включающей не только ДНК-полимеразы, но и другие белки см. ниже) как раз такова, чтобы обеспечить безошибочное воспроизведение всего генома или допустить лишь малое число ошибок. Так, у бактерий ошибки синтеза ДНК происходят не чаще чем один раз на много миллионов нуклеотидов. Молекулярные взаимодействия, на которых основаны ферментативные реакции, в частности синтез ДНК, не могут быть абсолютно надежными, кроме того, точность процесса связана с его скоростью. Для того чтобы обеспечить высокую точность наряду с высокой скоростью репликации, природе пришлось прибегнуть к специальным механизмам, один из которых — механизм коррекции. [c.47]

    Смещение в комплементарности пар, или ошибка репликации может происходить по другой схеме [c.219]

    Нормальное размножение клеток требует высокой точности копирования ДНК-матрицы. Генетический материал живых организмов имеет огромные размеры. Даже у бактерий ДНК-полимераза должна практически безошибочно скопировать молекулу ДНК длиной около 3-10 п. н. Оказывается, у всех организмов точность работы репликативной машины (включаюш.ей не только ДНК-полимеразы, но и другие белки см. ниже) как раз такова, чтобы обеспечить безошибочное воспроизведение всего генома или допустить лишь малое число ошибок. Так, у бактерий ошибки синтеза ДНК происходят не чаще чем один раз на много миллионов нуклеотидов. Молекулярные взаимодействия, на которых основаны ферментативные реакции, в частности синтез ДНК, не могут быть абсолютно надежными, кроме того, точность процесса связана с его скоростью. Для того чтобы обеспечить высокую точность наряду с высокой скоростью репликации, природе пришлось прибегнуть к специальным механизмам, один из которых — механизм коррекции. [c.47]

    Очень важно отметить, что процесс репликации протекает со значительно более высокой степенью точности, чем процессы транскрипции и трансляции. Частые ошибки в репликации подвергли бы большому риску сохранность видов [c.908]

    ДНК-полимеразы проверяют комплементарность каждого нуклеотида матрице дважды один раз перед включением его в состав растущей цепи и второй раз перед тем, как включить следующий нуклеотид. Очередная фосфодиэфирная связь образуется лишь в том случае, если последний (З -концевой) нуклеотид затравки комплементарен матрице. Если же на предыдущей стадии полимеризации произошла ошибка (например, из-за того, что нуклеотид в момент полимеризации находился в необычной таутомерной форме), то репликация останавливается до тех пор, пока неправильный нуклеотид не будет удален. Некоторые ДНК-полимеразы обладают не только полимеризующей, но и 3 -экзонуклеазной активностью, «Которая отщепляет не спаренный с матрицей нуклеотид затравки. После чего полимеризация восстанавливается, от механизм, коррекция, заметно увеличивает точность работы ДНК-полимераз. Мутации, нарушающие З -экзонуклеазную активность ДНК-полимеразы, существенно повышают частоту возникновения прочих мутаций. Напротив, мутации, приводящие к усилению экзонуклеазной актив- ности относительно полимеризующей, снижают темп мутирования Генетического материала. [c.47]

    Спонтанные генные мутации определяются ошибками при репликации ДНК, возникающими вследствие теплового движе-иия атомов и молекул. Очевидно, что ошибки транскрипции и трансляции не наследуются. [c.283]

    Процесс транскрипции находится в клетке под строгим контролем, поэтому имеет место как неодинаковое транскрибирование во времени разных участков ДНК (генов), так и неодинаковая скорость, с которой гены могут транскрибироваться. В результате количество молекул иРНК в клетке, комплементарных разным генам, сильно различается. Хотя в целом механизмы синтеза ДНК и РНК сходны, процесс транскрипции не обладает той степенью точности, которая характерна для репликации ДНК. Однако поскольку иРНК не способна к самовоспроизведению, возникающие при ее синтезе ошибки в последующих клеточных генерациях не воспроизводятся и, следовательно, не могут наследоваться. [c.142]

    Если ошибка синтеза не устраняется системами репарации, то неизбежна деформация дуплекса и искажение генетической программы. Такие сохраняющиеся при репликации изменения ДНК носят название мутации. Они могут быть спонтанными и индуцированными. Частота спонтанных мутаций невелика и составляет всего 10 —10 на клетку. В основном имеют место мутации, обусловленные действием внешних факторов физических (радиация), биологических (вирусы) и чужеродных химических веществ на генетический аппарат клеток. Наиболее многочисленными и опасными являются мутагены окружающей среды. Загрязнение воды и воздуха различными химическими отходами промышленных предприятий, химическими средствами защиты растений отрицательно сказывается на генетической программе всех живых организмов. В последние годы установлено, что ряд пищевых красителей, стабилизаторов и вкусовых добавок обладает выраженной мутагенной активностью, что привело к значительному ужесточению требований, связанных с применением химических веществ в пищевой промышленности. Многие лекарственные вещества также воздействуют на генетический аппарат клеток и должны подвергаться специальным генетическим испытаниям. [c.455]

    Химическое изменение оснований. Некоторые мутагенные вещества действуют путем химического изменения содержащихся в ДНК оснований, что приводит к ошибкам репликации. Вполне понятное изменение вызывает нитрит. Азотистая кислота дезаминирует аденин, гуанин или цитозин без разрыва или каких-либо других изменений полинуклеотидной цепи. В результате замещения аминогруппы гидроксильной группой аденин превращается в гипоксантин и спаривается с цитозином вместо тимина, что приводит к мутации АТ СС. Если цитозин дезаминируется в урацил, то он спаривается с аденином вместо гуанина, и это ведет к мутации СС -АТ. Будучи превращен в ксантин, гуанин по-прежнему спаривается с цитозином, т. е. дезаминирование С не вызывает мутации. Гидроксиламин вступает в реакцию главным образом с цитозином и изменяет его так, что тот спаривается с аденином значит, он тоже вызывает мутации СС ТА. [c.444]

    Из уровня спонтанных мутаций у бактерий в расчете на одно поколение рассчитано, что вероятность одной репликационной ошибки при синтезе ДНК составляет порядка 10 . Эту величину можно рассматривать как отношение скоростей реакций правильной репликации [c.194]

    ВЫВОД, ЧТО, по-видимому, код действительно является триплет-ным, причем кодирование начинается от определенной точки нуклеиновой кислоты. При этом большая часть трехбуквенных комбинаций соответствует определенным аминокислотам и лишь небольшая часть триплетов относится к бессмысленным. Число триплетов равно 4-4-4 = 64, т. е. значительно больше числа аминокислот. Некоторые из них, по-видимому, кодируют одну и ту же аминокислоту, т. е. код является вырожденным. Этот вывод согласуется с обнаружением в настоящее время двух и более типов растворимых РНК, специфичных к одной и той же аминокислоте. Вырожденность генетического кода может способствовать выживанию организма. Действительно, в случае невырожденного кода ошибка при репликации ДНК или при транскрипции должна скорее приводить к появлению бессмысленного триплета, чем в случае вырожденного кода. Следовательно, при невырожденном коде ошибки чаще вызывали бы прекращение синтеза соответствующего белка или образование незаконченных белковых цепей. Напротив, в случае вырожденного кода ошибки должны чаще приводить просто к замене одной аминокислоты на другую, что, как правило, не имеет серьезных последствий. [c.376]

    Как в прокариотических, так и в эукариотических клетках содержатся ферментные системы, способные исправлять ошибки репликации и различные формы повреждения ДНК, вызываемые гидро- [c.990]

    Г. Е. Фрадкин. После обработки фаговой популяции гидроксиламино.м последний при помощи диализа удалялся из вирусной суспензии. Следовательно, во время облучения гидроксиламин в среде отсутствовал. Предварительная модификация цитозиновых остатков в ДНК фага лямбда, вызываемая гидроксиламином (предположительно образование 4—5-дигидро-4-гидро-ксиламиноцитозина), действительно повышает радиочувствительность фаговой популяции в условиях преобладания непрямого эффекта излучения. Мы полагаем, что механизм повышения радиочувствительности сводится к нарушению специфического процесса комплементарного спаривания азотистых оснований во время репликации фаговой ДНК внутри клетки. В последних рабо тах Брауна, Филипса с соавторами химическими методами установлено, что цитозин, предварительно обработанный гидроксиламином, спаривается не с гуанином, а с аденином. Вследствие этого во вновь образованной ДНК происходят единичные замены гуанина на аденин. До тех пор, пока эти замены не выходят за пределы связанных серий однозначных кодонов, они не сказываются на информационных свойствах ДНК фага. Однако эти единичные замены понижают эффективность механизма, исправляющего ошибки включения, за счет уменьшения резерва однозначны кодонов или, иными словами, за счет уменьшения степени вырожденности структурного кода. Мы не видим большой сложности в этом объяснении, к которому мы сознательно прибегли для освещения возмол<ных молекулярных механизмов, лежащих в основе скрытых повреждений, связанных с тонкими сдвигами в величинах водородных сил в химически модифицированных азотистых основаниях. Как известно, сенсибилизация может обусловливаться уменьшением степени прочности первичной структуры ДНК вследствие лабилизации эфирно-фосфатных связей. Однако при использовании в качестве модифицирующего агента гидроксиламина этот второй механизм отсутствует, так как химическими исслг- [c.173]

    Включение или утрата отдельных пар оснований. Профлавин и другие акридиновые красители действуют по-иному. Вероятно, молекула акридина внедряется между соседними основаниями цепи ДНК и увеличивает расстояние между ними (интеркаляция). Такое пространственное изменение при репликации ДНК может вызывать ошибки двух типов- [c.444]

    НО редко, он может образовать пару не с аденином, а с гуанином. Это в свою очередь приведет к ошибке при включении или при репликации, заключающейся в замене пары А — Т на Г — Ц и наоборот. [c.218]

    В 1959 г. Д. Пратт сумел показать, что большинство, если не все бромурациловые ревертанты г+, образуемые мутантами гП (которые были индуцированы аналогами оснований), возникают в виде гетерозигот гП/г» , которые позднее расщепляются на гомозиготные ревертанты г» «. Чтобы продемонстрировать это, к бактериям, зараженным мутантным фагом Т4гП, непосредственно перед окончанием скрытого периода внутриклеточного развития фага добавляли бромурацил и первые инфекционные частицы, появившиеся в клетках непосредственно после окончания скрытого периода, высвобождали путем искусственного лизиса клеток. Такая методика постановки опыта гарантировала, что все ревертанты / +, возникшие и извлеченные из фонда предшественников фаговой ДНК во время короткого воздействия мутагена, образовались исключительно в самом последнем цикле репликации. Ошибка копирования, восстановившая у них в соответствующем участке ДНК генетическую информацию дикого типа г+, произошла настолько поздно, что больше и и одного цикла репликации произойти уже не могло (а это значит, что не могло произойти и расщепления на гомозиготные мутантные структуры). Такого рода опыты показали, что свыше 80% всех ревертантов г, возникших в результате кратковременного контакта с бромурацилом, действительно представляет собой мутационные гетерозиготы, несущие как исходный аллель г, так и ревертировавщий к дикому типу аллель г» . Следовательно, в полном соответствии с механизмом Уотсона и Крика и вопреки механизмам, предусматривающим консервативное распределе- [c.325]

    Нетрудно видеть, что в тонком механизме репликации и синтеза белков произвол в расположении частиц сведен к минимуму. Этот матричный процесс является низкоэнтропийным. Ошибки в размещении аминокислот в пептидных цепочках составляют по приблизительной оценке 1 на 10 . В то же время, если бы синтез белков происходил на примитивной матрице, на которой концентрация тех или иных компонентов и их относительное расположение в значительной мере определялись бы случайностями окружающей обстановки, нельзя было бы ожидать воспроизводимости синтеза того или иного белка и, в частности, того белка, от структуры ко- [c.393]

    Репликаза фага Q способна in vitro синтезировать цепи, полностью комплементарные как плюс-, так и минус-молекулам вирусной РНК. Система, однако, специфична для вирусной РНК и не может копировать никаких других полинуклеотидов. Возможно, что для инициации процесса репликации нужно, чтобы на З -конце имелись определенные последовательности. В пробирке репликация протекает с ошибками, такими, в частности, как преждевременная терминация цепи и неправильное спаривание оснований. В результате происходит образование мутантных форм РНК, что дает возможность получать молекулы РНК, размеры которой будут значительно меньше, чем у вирусной РНК, и которые будут при этом легко реплицироваться репликазной системой фага Q . Была установлена нуклеотидная последовательность одного из таких фрагментов, включающего всего лишь 114 нуклеотидов . [c.245]

    Разные аллели одного и того же Г. возникают благодаря мутациям-илслецуемьш изменениям в структуре исходного Г. В норме Г. чрезвычайно стабилен и при удвоении хромосом во время репликации ДНК воспроизводится совершенно точно вероятность ошибки не превышает 10″ . Мутации происходят редко и обычно влекут за собой неблагоприятные последствия для организма, т. к. нарушается его способность синтезировать нормальный белок. Однако в целом это явление играет положит, роль накопление редких полезных мутаций создает основу генетич. изменчивости, необходимой для эволюции. [c.517]

    Особый класс М. составляют соед., представляющие собой аналоги оснований ДНК-5-галогенурацилы, 2-амино-и 6-метиламинопурины н др. Галогенурацилы включаются в ДНК при матричном синтезе вместо тимина, 2-амино-пурин-вместо аденина. Вследствие различий в положении кетоенольного равновесия у тимина и галогенурацилов (при включении последних в ДНК) увеличивается частота ошибочных спариваний оснований и возникают ошибки при репликации. [c.152]

    Равновесие между созидательными возможностями выбора среди специфических оснований в ДНК (созидательные мутации) и точностью синтеза белков (поддерживающих жизнь организма) является основой эволюции. Ферменты, которые заряжают тРНК специфической аминокислотой, обладают очень низкой вероятностью ошибки, порядка 1 Ю» для гомологичных аминокислот. При репликации точность даже выше, и величина ошибки редко превышает 1 на 10.  [c.212]

    К настоящему времени у эукариот, как и у бактерий (см. ранее), открыто несколько ДНК-полимераз. В репликации ДНК эукариот участвуют два главных типа полимераз — а и б. Показано, что ДНК-полимераза а состоит из 4 субъединиц и является идентичной по структуре и свойствам во всех клетках млекопитающих, причем одна из субъединиц оказалась наделенной праймазной активностью. Самая крупная субъединица ДНК-полимеразы а (мол. масса 180000) катализирует реакцию полимеризации, преимущественно синтез отстающей цепи ДНК, являясь составной частью праймасомы. ДНК-полимераза б состоит из 2 субъединиц и преимущественно катализирует синтез ведущей цепи ДНК (см. далее). Открыта также ДНК-полимераза г, которая в ряде случаев заменяет б-фермент, в частности при репарации ДНК (исправление нарушений ДНК, вызванных ошибками репликации или повреждающими агентами). Следует отметить, что в эукариотических клетках открыты два белковых фактора репликации, обозначаемых RFA и RF . Фактор репликации А выполняет функцию белка—связывание одноцепочечной ДНК (наподобие белковых факторов связывания разъединенных цепей ДНК при [c.480]

    Этап HI — терминация синтеза ДНК —наступает, скорее всего, когда исчерпана ДПК-матрица и трансферазные реакции прекращаются. Точность репликации ДНК чрезвычайно высока, возможна одна ошибка на 10 трансферазных реакций, однако подобная ошибка обычно легко исправляется за счет процессов репарации. [c.486]

    Такие системы, достигшие определенного уровня сложности, наталкиваются на границу генетически переносимого количества информации. Оно составляет около 10 бит. Оптимальное значение ошибки при репликации нуклеиновой кислоты — 10 . Это — системно-обусловленная граница. Ее преодоление было достигнуто в нрироде созданием пола и геыегической рекомоина- [c.549]

    Приближенная модель репликации ДНКизображена на рис. 2.11. Из приведенной схемы видно, что репликация точно воспроизводит прежнюю (исходную) структуру ДНК. Но если произошла ошибка в процессе копирования (мутация), то она будет с предельной точностью копироваться при последующих репликациях изменившейся ДНК. Показано, что участки ДНК, содержащие скопления нуклеотидов, обладают повышенной склонностью к спонтанным мутациям [22]. [c.94]

    По происхождению мутации делятся на спонтанные (неконтролируемые) и индуцированные (контролируемые). Первые возникают в результате неконтролируемого влияния каких-то естественных факторов (радиация, температура и т. д.). Направленное использование мутагенов приводит к возникновению индуцированных мутаций. Многими экспериментами четко показано, что мутации возникают независимо от условий среды обитания, т. е. не направленно. Мутации возникают в основном как ошибки репликации ДНК. Выделяют следующие типы мутаций перестройка хромосом, перестройка генома клетки грибов и водорослей (полиплоидия, гаплоидия, гетероплоидия), внутригенные изменения (прямые мутации, реверсии, обратные мутации). [c.102]

    Ошибка в одном основании при репликации ДНК, если она не исправлена, приведет к тому, что одна из двух дочерних клеток, а также все ее потомки будут содержать измененную хромосому. Ошибка в одном основании, совершенная РНК-полимеразой, повлечет за собой синтез некоторого количества неправильных копий одного белка. При этом, поскольку пул мРНК в клетке быстро обновляется, большинство молекул этого белка будет нормальным. Потомство такой клетки тоже будет нормальным. [c.1004]

    Анализ приведенных выше результатов дает возможность написать для преобладающих таутомерных форм оснований нуклеиновых кислот формулы, изображенные на фиг. 55. Минорные таутомерные формы, возможно, играют существенную роль в возникновении спонтанных мутаций, поскольку спаривание несоответствующих оснований (см. гл. ХУП1) должно привести к ошибке при включении оснований и при последующей репликации цепи. Можно показать, что если скорость включения основания в цепь нуклеиновой кислоты меньше скорости перехода минорного таутомера в доминирующую форму, то скорость спонтанных мутаций, обусловленных данным основанием, приблизительно равна константе равновесия между минорным и доминирующим таутомерами. К сожалению, для азо- [c.308]

    Если ДНК представляет собой генетический материал, то возникает весьма важный вопрос каким образом ДНК реплицируется столь точно, что при передаче генетических признаков очень редко возникают ошибки Так как количество ДНК, приходящееся на гаплоидный набор хромосом, есть величина постоянная, делящаяся клетка должна синтезировать ДНК- Для того чтобы наследственная информация, содерлсащаяс в ДНК, была передана без ошибок, вновь синтезированная ДНК должна представлять собой точную копию исходной. На фиг. 61 изображены схемы двух предполагаемых типов репликации ДНК консервативного и полуконсервативного. [c.327]

    Задание 189. Напишите программу для моделирования самоорганизации ДНК в качестве примера самоорганизуюшихся систем. Используйте для этого следующую простую модель. Пусть имеется 100 молекул ДНК, состоящих из 12 нуклеотидов четырех видов (их обозначим буквами А, Т, С и G). Последовательность нуклеотидов в этих 100 молекулах ДНК случайная. Назовем одну из последовательностей идеальной она имеет некоторые преимущества перед остальными. Из 100 молекул ДНК в результате репликации получается еще 100 молекул. Однако при репликации встречаются ошибки (мутации), например в количестве 1%. Теперь из 200 молекул 100 погибает. При этом имеет значение преимущество, которым обладают молекулы с последовательностью нуклеотидов, похожей на идеальную . (Например, при каждом совпадении нуклеотида и его положения в цепи с идеальной последовательностью вероятность гибели уменьшается в два раза.) Процессы репликации и гибели протекают очень быстро. В конце концов все молекулы ДНК должны получить идеальную последовательность нуклеотидов, хотя вероятность ее образования в результате случайного процесса составляет 1 16777216. Что будет, если мутации будут возникать чаще или реже  [c.330]

    Нетрудно видеть, что в тонком механизме репликации и синтеза белков произвол в расположении частиц сведен к минимуму. Этот матричный процесс является низкоэнтропийным. Ошибки в размещении аминокислот в пептидных цепочках составляют по приблизительной оценке 1 на 10 . В то же время, если бы синтез белков происходил на примитивной матрице, на которой концентрация тех или иных компонентов и их относительное расположение в значительной мере определялись бы случайностями окружающей обстановки, нельзя было бы ожидать воспроизводимости синтеза того или иного белка и, в частности, того белка, от структуры которого зависят жизненно важные свойства системы. Здесь кодирование матричного синтеза обусловлено целым рядом низших кодов кодом, отвечающим соответствию т-РНК и аминокислоты кодом, соответствующим отношению между т-РНК, рибосомой и м-РНК кодом ферментов, производящих замыкание пептидных связей, и т. д. Это — кодированный перенос массы, обусловливающий возникновение структуры, обладающей исключительными свойствами их исключительность состоит в том, что они необходимы для стабилизации синтеза этой же структуры на уровне всех не только низших, но и многих высших кодов, которые возникнут, когда белки сложатся в клетки, клетки в органы, а органы в организм. [c.205]