2 определение резус фактора способы определения возможные ошибки

Антигены резус являются вторыми по
значению в трансфузионной практике
после групп крови системы АВО В период
активного внедрения в клинику
гемотрансфузий значительно воз­росло
число посттрансфузионных осложнений
после повторныхпереливаний совместимой
по антигенам АВО крови. В систему резус
входят шесть антигенов, для обозначения
которых парал­лельно используются
две номенклатуры: Винера (Rh₀,rh’,rh»,Hr₀,hr’,hr»); Фишера и Рейса (D,
С,E,d, с,e).

Rh₀
— D, rh’ — C, rh» — E, Hr₀
— d, hr’ — c, hr» — e.

Поскольку в этой системе наиболее
активным является антиген Rho(D),
его называют резус-фактором. Именно в
зависимости от наличия или отсутствия
этого фактора людей разделяют на
резус-положительных (Rh+)
и резус-отрицательных (Rh-).
Такое деление принято только в отношении
реципиентов. Антигеныrh'(C)
иrh»(E)
менее активны, чемRho(D),
но к ним также могут вырабатываться
антитела у людей, не содержащих антигенов
С и Е в эритроцитах. Поэтому к эритроцитам
резус отрицательных доноров требования
более строгие. Эритроциты не должны
содержать не только антигенD,
но также и С и Е. АнтигеныHro(d),hr'(c),hr»(e)
характеризуются низкой активностью,
хотя антителаhr'(c)
могут быть причиной изоиммунологических
конфликтов. У 1—3% резус-положительных
лиц в эритроцитах имеет слабый вариант
антигенаD—D»,
который определяет наличие мелкой,
сомнительной агглютинации при определении
резуc- фактора. В этих
случаях резус-принадлежность крови
реципиента или беременной женщины
указывают как резус-отрицательную
(Rh-), а резус-принадлежность
крови донора как резус-положительную
(Rh+). Не допускается
переливание крови с ангеномD^uрезус-отрицательным реципиентам.
Формируются антигены резус на 8—10 неделе
эмбриогенеза, причем антигенность их
даже может превышать активность
ан­тигенов у взрослых. Система резус
в отличие от системы АВО не имеет
естест­венных антител. Антитела
антирезус возникают только после
иммунизации резус-отрицательного
организма в результате переливания
резус-положительной крови или беременности
резус-положительным плодом. В организме
сенсибилизированных лиц антитела к
резус-антигенам сохраняются несколько
лет, иногда на протяжении всей жизни. В
большинстве случаев титр антител
антирезус постепенно снижается, но
опять резко возрастает при повторном
попадании в организм резус-положительной
крови. Резус-антитела различаются по
специфичности (анти-D, ан-
III С и т. д.) и по серологическим свойствам
(полные и непол­ные). Полные антитела
вызывают агглютинацию эритроцитов в
солевой среде при комнатной температуре.
Для проявления агглютинации под действием
неполных антител требуются особые
условия: повышенная температура,
коллоидная среда (желатин, сывороточный
белок). Полные антитела (IgM)
синтезируются в начале иммунной реакции
и вскоре исчезают из крови. Неполные
антитела (IgG,IgA)
появляются позже, синтезируются долго
и являются причиной развития гемолитической
болсзни новорожденных, так как проходят
через плаценту и повреждают клетки
плода.

Определение
резус-принадлежности крови

Метод определения резус-фактора зависит
от формы резус-антител в стандартной
сыворотке и способа ее изготовления. К
сыворотке антирезус прикладывается
сопроводительная инст­рукция с
описанием того метода, для которого
предназначена данная серия выдаваемой
сыворотки.

При каждом исследовании для проверки
специфичности и активности сыворотки
антирезус необходимо ставить контроль.
Для контроля применяются стандартные
резус-положительные эритроциты группы
0(1) или той же группы, что и исследуемая
кровь, и стандартные резус-отрицательные
эритроциты обязательно той же группы,
что и исследуемая кровь.

Определение резус-фактора рекомендуется
производить двумя сериями стандартных
сывороток антирезус.

При определении резус-принадлежности
двумя сериями стан­дартных сывороток
в тех случаях, когда они используются
раз­ными методами, результат учитывается
как истинный при совпадении его в обеих
сериях исследований после проверки
контрольных образцов, подтверждающих
специфичность и активность каждой серии
сыворотки антирезус, т. е. при отсутствии
агглютинации со стандартными
резус-отрицательными эритро цитами
одноименной группы и наличии агглютинации
со стандартными резус-положительными
эритроцитами одноименной группы или
группы 0(1) и в контрольных пробах без
сыворотки (реагента) антирезус. Если
при определении резус-принаддеж ности
наблюдается слабая или сомнительная
реакция, то следует повторно исследовать
кровь данного лица этими же и другими
сериями сыворотки антирезус и желательно
включить сыворотку содержащую полные
антитела. Если при этом все серии
сывороток, содержащих неполные антитела,
дадут также слабую
или сомнительную реакцию,
а с полными антителами реакция будет
отрицательная, это значит, что эритроциты
содержат слабуюpaзновидность
антигена резус, так называемый факторD^u. В
этих случаях резус-принадлежность крови
больного или беременной женщины указывают
как резус-отрицательную (Rh-),aрезус- принадлежность
крови донора как резус-положительную
(Rh+), не допуская таким
образом переливания его крови
резус-отрицательным
реципиентам.

Определение резус-фактора можно проводить
также следующими методиками.

• Определение резус-фактора Rh₀(D)
  реакцией конглютинации с применением
  желатина (в пробирке с подогревом
  до 46-48 °С).

• Определение резус-фактора Rho(D)
  реакцией конглютинации в сывороточной
  среде на плоскости с подогревом.

• Определение резус-фактора Rh₀(D)
  реакцией агглютинации в солевой среде
  в маленьких пробирках. Реакция
  агглютинации в солевой среде пригодна
  для работы только с сывороткой,
  содержащей полные резус-антитела.

• Определение резус-фактора Rh₀(D)
  с помощью моноклональных антител.

— Определение резус-фа ктора Rho(D)
с помощью непрямой пробы Кумбса.

19 Анемии. Классификация и краткая
характеристика. Этиология и патогенез
анемий.Анемия (от греческогоanemia— бескровие) — большая груп­па
заболеваний, которая характеризуется
снижением количества гемоглобина или
гемоглобина и эритроцитов в единице
объема крови. Анемии различны по
этиологии, механизмам развития,
клинико-гематологической картине,
поэтому есть много различных классификаций,
но они недостаточно совершенны. Л. И.
Идельсон предложил рабочую классификацию
анемий для врачей-клиницистов: 1) острые
постгеморрагические анемии; 2)
железодефицитные анемии; 3) анемии,
связанные с нарушением синтеза или
утилизации порфиринов (сидеробластные);
4) анемии, связанные с нарушением синтеза
ДНК, РНК (мегалобластные); 5) гемолитические
анемии; 6) анемии, связанные с угнетением
пролиферации клеток костного мозга
(гипопластические, апластические); 7)
анемии, связанные с замещением
кроветворного костного мозга опухолевым
процессом (метапластические).

Анемия может быть как самостоятельным
заболеванием, так и сопутствующим
симптомом или осложнением некоторых
внутренних болезней, инфекционных и
онкологических заболевании. Бывают
полифакторные анемии, т. е. смешанного
генеза, например: гемолитическая анемия
с дефицитом железа, апластическая анемия
с гемолитическим компонентом и др.

В зависимости от:

1)величины цветового
показателя различают анемии:

-нормохромные
(цветовой показатель 0,9—1,1);

-гипохромные
(цветовой показатель меньше 0,85);

-гиперхромные
(цветовой показатель больше 1,15);

2)величины среднего
диаметра эритроцитов:

-нормоцитарные (средний диаметр
эритроцитов 7,2—7,5 мкм)

-микроцитарные (средний диаметр
эритроцитов меньше 6,5 мкм),

-макроцитарные (средний диаметр
эритроцитов больше 8,0 мкм),

-мегалоцитарные
(средний диаметр эритроцитов равен
больше 12 мкм);

3)величины среднего объема эритроцитов
в фемтолитрах (фл, 1 фл равен 1 мкм³):

-нормоцитарные (средний объем эритроцитов
87±5 фл);

-микроцитарные (средний объем эритроцитов
меньше 80 фл);

-макроцитарные (средний объем эритроцитов
больше 95 фл);

4) уровня ретикулоцитов
в периферической крови.

-регенераторные
(количество ретикулоцитов 0,5—5%);

-гиперрегенераторные (количество
ретикулоцитов больше 5%);

-гипо- и арегенераторные (количество
ретикулоцитов сни­жено или они
отсутствуют, несмотря на тяжелое течение
анемии).

Уровень ретикулоцитов является
показателем регенераторной функции
костного мозга в отношении эритропоэза.

К нормохромным анемиям относятся острые
постгеморраги­ческие (в первые дни
после кровопотери), гипо- и апластические,
несфероцитарные гемолитические,
аутоиммунные гемоли­тические,
метапластические (при лейкозах, миеломной
болезни и др.), а также анемии, развивающиеся
при эндокринных нару­шениях (гипофункция
надпочечников), болезнях почек,
хрони­ческих инфекциях.

К гипохромным анемиям относятся
железодефицитные, си- деробластные,
некоторые миелотоксические, гемолитические
(талассемия).

Гиперхромными бывают
В12-(фолиево)-дефицитные,
некото­рые гемолитические анемии
(наследственный микросфероцитоз, если
среди эритроцитов в мазке преобладают
микросфероциты). Иногда витамин-В1₂-дефицитная
анемия бывает нормохромной.

К нормоцитарным относятся острые
постгеморрагические, апластические,
аутоиммунные гемолитические анемии и
др.

К микроцитарным относятся железодефицитные,
сидеробластпые анемии, к макроцитарным
— вигамин-В12-(фолиево)-дефицитные
анемии и др.

К регенераторным относят постгеморрагические
анемии; к гиперрегенераторным —
гемолитические анемии, особенно
со­стояние после гемолитического
криза; к гипо- и арегенераторным —
гипопластические, апластические анемии.

Костный мозг реагирует на развитие
железодефицитных, ге­молитических
анемий раздражением, гиперплазией
красного рост­ка. При гипопластических
анемиях отмечается прогрессирующее
падение эритропоэза вплоть до полного
его истощения.

20.Лабораторная диагностика
железонасыщенных и железоненасыщенных
анемий. Железодефицитная анемия.
Виды дефицита железа. Лабораторные
тесты, отражающие дефицит железа в
организме. Картина периферической крови
и костного мозга при ЖДА. Лабораторная
диагностика сидеробластных анемии.
Обмен и роль железа в организме

Железо имеет большое значение для
организма, входит в со­став гемоглобина,
миоглобина, дыхательных ферментов. Оно
распределяется по основным фондам.

Гемоглобиновый
фонд.Железо гемоглобина
составляет 60— 65% от общего содержания
железа в организме.

Запасной
фонд.Это железо ферритина и
гемосидерина, кото­рые депонированы
в печени, селезенке, костном мозге,
мышцах. Составляет 30—40% от уровня железа
в организме. Ферритин — водорастворимый
комплекс трехвалентного железа и белка
апоферритина, содержащий 20% железа.
Представляет собой ла­бильную фракцию
запасного фонда железа. При необходимости
легко используется для нужд эритропоэза.
Гемосидерин — не­растворимый в воде
белок, по составу близок к ферритину,
но содержит большее количество железа
— 25—30%. Является ста­бильной, прочно
фиксированной фракцией запасов железа
в организме.

Транспортный
фондпредставлен железом,
связанным с транспортным белком
трансферрином. Составляет 1% от содер­жания
железа в организме.

Тканевой
фондпредставлен железом
железосодержащих фер­ментов (цитохромы,
пероксидаза и др.), миоглобина. Составляет
1% от содержания железа в организме.

Общее содержание железа в организме
взрослых равно 4—5 г. Оно поступает в
организм с пищевым рационом. Содержится
в продуктах животного и растительного
происхождения (мясо, особенно говядина,
печень, яйца, бобовые, яблоки, курага и
др.). Железо всасывается гораздо лучше
из продуктов животного про­исхождения,
чем растительного, так как оно содержится
в них в форме гема. Так, из мяса всасывается
20—25%, из рыбы — 11%, из растительных
продуктов — 3—5% содержащегося в них
железа. Всасыванию железа способствуют
аскорбиновая кислота, орга­нические
кислоты (лимонная, яблочная и др.),
ингибируют вса­сывание танин, высокое
содержание жира в рационе. Всасыва­ние
железа из пищевых продуктов лимитировано.
За сутки вса­сывается 2—2,5 мг железа,
кратковременно после сильного
кро­вотечения может всасываться до
3 мг железа. Основное количест­во
железа всасывается в 12-перстной кишке
и в начальной части тощей кишки. Малое
количество железа может всосаться во
всех отделах тонкого кишечника.

Всасывание железа происходит в два
этапа: 1) слизистая обо­лочка кишечника
захватывает железо, поступающее с
пищевым рационом; 2) железо из слизистой
оболочки кишечника перехо­дит в кровь,
нагружается на трансферрин и доставляется
к мес­там использования и в депо.
Трансферрин также переносит железо из
его фондов и клеток системы фагоцитирующих
мононук леаров, в которых происходит
деструкция эритроцитов, в костный мозг,
где оно частично используется для
синтеза гемоглобина, а частично
откладывается в виде железа запасов, а
также в другие места хранения железа.
Обычно с железом связывается 1/3 часть
трансферрина. Ее называют связанным
трансферрином или сы­вороточным
железом. В норме содержание железа в
сыворотке у мужчин и женщин составляет,
соответственно, 13—30 и 12—25 мкмоль/л.
Часть трансферрина, не связанную с
желе­зом, называют свободным
трансферрином или ненасыщенной, латентной
железосвязывающей способностью
сыворотки. Мак­симальное количество
железа, которое мог бы присоединить
трансферрин до своего насыщения,
обозначают как общую железосвязывающую
способность сыворотки (ОЖСС) (в норме
30-85
мкмоль/л).
Разница между показателями ОЖСС и
сывороточным железом отражает латентную
железосвязывающую способ­ность, а
отношение сывороточного железа к ОЖСС,
выраженное в процентах, отражает процент
насыщения трансферрина желе­зом
(норма 16—50%). Для суждения о величине
запасов железа и организме проводят:

-исследование уровня ферритина в
сыворотке радиоимун ными методами;

-десфераловый тест. Десферал (десфероксамин)
является комплексоном, который после
введения в организм избира­тельно
связывается с железом запасов, т. е. с
железом ферри­тина, и выводит его с
мочой. Больному однократно внутри­мышечно
вводят 500 мг десферала, собирают суточную
мочу и определяют в ней содержание
железа. После введения десферала с мочой
в норме выводится от 0,8 до 1,2 мг железа,
в то время как у больных железодефицитной
анемией или при на­личии скрытого
дефицита железа количество выделяемого
е мочой железа резко снижается;

-подсчет в пунктате костного мозга
количества сидеробла- стов, а в
периферической крови — сидероцитов.
Сидеробласты — это нормобласты, т. е.
ядросодержащие клетки красного ряда,
в цитоплазме которых выявляются синего
цвета гранулы железа запасов — ферритина.
В норме 20—40% нормобластов являются
сидеробластами. Сидероциты — это
эритроциты, в которых обнаруживаются
гранулы ферритина. В норме в периферической
кровг: до 1% сидероцитов. Гранулы ферритина
в сидеробластах и сидероцитах выявляются
при специальной окраске берлинской
лазурью.

Организму свойственны физиологические
потери железа с мочой, калом, желчью,
слущившимися клетками слизистой ки
шсчника, с потом, при стрижке волос,
ногтей. Женщины теряют железо с месячными.

Развитию железодефицитной анемии
предшествует скрытый (латентный) дефицит
железа. У больных появляются жалобы и
клинические признаки, характерные для
железодефицитной пиемии, но менее
выраженные (слабость, умеренная бледность
кожных покровов и видимых слизистых
оболочек, головные боли, сердцебиение,
часто извращение вкуса и обоняния,
сухость кожи, ломкость ногтей и др.). При
обследовании еще не обна­руживается
изменений в содержании гемоглобина,
эритроцитов и других показателей
периферической крови. Но выявляются
нарушения в обмене железа: снижается
сывороточное железо, Повышаются общая
и латентная железосвязывающие способности
сыворотки, уменьшается процент насыщения
трансферрина, снижается уровень железа
запасов. Это сидеропения без анемии.
Скрытый дефицит железа может развиться
в любом возрасте, особенно часто им
страдают женщины, подростки и дети. Если
скрытый дефицит железа не компенсируется,
а углубляется, раз­минается
железодефицитная анемия.

Железодефицитные
анемии

Это широко распространенные заболевания,
составляющие 80% от числа всех анемий.
При железодефицитных анемиях снижается
содержание железа в сыворотке крови,
костном мозге и и депо. У больных
развиваются гипохромная анемия и
трофи­ческие нарушения в тканях.

Лабораторная
диагностика железодефицитных анемий

ВI начальной стадии болезни уменьшается
содержание гемоглобина на фоне нормального
количества эритроцитов. Затем
присоединяется и уменьшение числа
эритроцитов, но менее выраженное, чем
гемоглобина. В зависимости от снижения
уровня гемоглобина различают разные
степени тяжести железодефицитной
анемии: легкая — гемоглобин 110—90 г/л;
средней тяжести – менее90 до 70 г/л; тяжелая
— менее 70 г/л. Выделяют и крайне тяжелую-
гемоглобин 30—20 г/л.

Цветовой показатель ниже нормы. Анемия
гипохромная. Гипохромия является
показателем дефицита железа в организме.
Эритроцитыбледные, центральное просветление у
них увеличе­но. Анизоцитоз за счет
микроцитоза. Средний диаметр, среднийобъемэритроцитов и средняя концентрация
гемоглобина в эрит­роцитеснижены. При выраженной железодефицитной
анемии появляются мишеневидные
эритроциты, анулоциты (эритро­циты,
центральное просветление которых
настолько увеличено, что они приобретают
вид пустых колец), планоциты. Количество
ретикулоцитов нормальное, на фоне
хронических кровопотерь или приема
препаратов железа может быть небольшой
ретикулоцитоз. Содержание лейкоцитов
в норме, но есть склонность к лейкопении
за счет нейтропении. Уровень тромбоцитов
чаще и норме, но на фоне кровопотерь
могут быть небольшие тромбо­цитозы.
СОЭ незначительно ускорена. Гематокрит
снижен.

В костном мозге раздражен красный
росток, но иногда отмечается умеренное
преобладание клеток красного ряда.
Нарушается гемоглобинизация
эритрокариоцитов, увеличивается
количество базофильных и полихроматофильных
нормобластов. Уменьшается число
оксифильных нормобластов, при тяжелых
анемиях они могут отсутствовать.
Сыворотка крови бледная, так как снижается
уровень билирубина, кото­рый является
продуктом деструкции гемоглобина.

Характерными изменениями для
железодефицитной анемии ЯВЛЯЮТСЯ:
уменьшение содержания сывороточного
железа, уве­личение ОЖСС (у некоторых
больных сохраняется нормальный уровень
ОЖСС), увеличение латентной железосвязывающей
спо­собности сыворотки, снижение
процента насыщения трансфер­рина.
Кровь для анализа следует брать в
утренние часы, так как имеют место
суточные колебания концентрации железа
в сыво­ротке (в утренние часы уровень
железа выше). Исследования должны
проводиться до начала лечения препаратами
железа или не ранее, чем через 5—7 дней
после их отмены. Чтобы предотвратить
завышение результатов, полученных при
определении сывороточного железа, кровь
берут в специально подготовлен­ные
пробирки, тщательно вымытые дважды
дистиллированной попой и высушенные.
Нельзя использовать в подготовке посуды
и в ходе выполнения самой методики
обычную дистиллирован­ную воду,
поскольку она содержит следы железа.

При железодефицитных анемиях снижаются
запасы железа и организме, что
подтверждается проведенными исследованиями:
снижается содержание в сыворотке крови
ферритина; результаты десфералового
теста показывают уменьшение количества
запасного железа, выводимого с суточной
мочой после введения десферала; в костном
мозге снижается количество сидеробластов,
в периферической крови уменьшается
количество сидероцитов или они
отсутствуют. Снижается содержание
факторов неспеци­фической иммунологической
защиты организма: титра лизоцима,
р-лизинов, комплемента, иммуноглобулинов
G,
М.
Падает фагоцитарная активность
нейтрофилов.

АНЕМИИ, СВЯЗАННЫЕ С НАРУШЕНИЕМ СИНТЕЗА
ИЛИ УТИЛИЗАЦИИ ПОРФИРИНОВ

Эту группу анемий еще называют
сидеробластными, сидеро- ахрестическими
или железонасыщенными анемиями. В
организ­ме содержится много железа,
но оно не используется в должной мере
для эритропоэза. Откладываясь в печени,
может привести к циррозу, в поджелудочной
железе — к диабету, в мышце сердца — к
нарушению кровообращения, в надпочечниках
— к надпочечниковой недостаточности.

У больных снижается уровень гемоглобина
в крови, развива­ется гипохромная
анемия с высоким содержанием железа в
сы­воротке крови и в депо.

Железодефицитные
и сидеробластные (железонасыщенные)
анемии являются гипохромными. Гипохромный
харак­тер служит ключевым признаком
при диагностике анемий. Он позволяет в
первую очередь заподозрить
железодефицитнуюанемию, которая
встречается наиболее часто среди
гипохромных анемий, но не исключает
наличие гипохромной анемии другого
происхождения (сидеробластные анемии,
талассемия). Подход к лечению этих анемий
различный. Больных железодефицитными
анемиями лечат препаратами железа. При
сидеробластных ане­миях прием железа
противопоказан, так как он может резко
ухудшить состояние больных. Поэтому
лечение сидеробластных анемий
предусматривает выведение из организма
имеющихся излишков железа.

21.
Апластические (гипопластические) анемии.
Механизмы развития. Классификация.
Особенности клеточного состава костного
мозга и периферической крови. Агранулоцитоз
Основные формы. Характерные изменения
общего анализа крови, картины костного
мозга.

Гипопластические и апластические анемии
— заболевания, при которых наступает
резкое угнетение кроветворения в костном
мозге, но отсутствуют признаки
гемобластозов, т. е. опухолей кроветворной
ткани. Уменьшается количество клеток
в периферической крови и в костном мозге
за счет угнетения всех трех ростков
кроветворения. Это полиэтиологические
заболевания, в возникновении которых
большую роль играют не только причинные
факторы, но и индивидуальная реактивность
организма. Несомненное значение имеют
и наследственные факторы.Различают
наследственные и приобретенные формы
болезни Приобретенные формы связаны с
воздействием: химических факторов
(бензола и его производных, паров ртути,
кислот, лаков, красителей, инсектицидов,
минеральных удобрений); физи­ческих
факторов (ионизирующей радиации); приема
лекарств (цитостатиков, антибиотиков,
сульфаниламидов, противосудорожных и
др.). Иногда заболевание развивается на
фоне вирус­ных инфекций (вирусного
гепатита, инфекционного мононук леоза),
при генерализованных формах туберкулеза,
сифилиса при тяжелых септических
заболеваниях. В этиологии гипо и
апластических состояний имеют значение:
эндогенные факторы (эндокринные нарушения
при гипотиреозе, доброкачественной
опухоли вилочковой железы); истощение
костного мозга при интенсивном
кроветворении (гипопластический криз
при гемолитической анемии); вытеснение
нормального кроветворс ния при лейкозах,
метастазах опухоли в костный мозг (мета
пластическая гипоплазия); гипоплазия
аутоиммунного генеза (при коллагенозах,
лимфопролиферативных заболеваниях,
иммунодефицитах и др.), изоиммунного
генеза (при многократном переливании
крови); гипоплазия красного ростка из-за
сниже­ния образования эритропоэтина
при почечной недостаточности, опухоли
почек, инфекционных заболеваниях;
спленогенная панцитопения и др.Причины
развития около 50% случаев заболевания
не выяс­нены (идиопатические формы).
Все гипопластические состояния
кроветворения, несмотря на многообразие
этиологических и кли­нических форм,
имеют один патоморфологический субстрат
— об­щее угнетение кроветворения, т.
е. «панмиелопатию».Предполагают, что
под влиянием химических веществ, виру­сови других причин поражается родоначальная
стволовая клетка или ее кроветворное
микроокружение, которое обеспечивает
регуляцию ее функционирования и деления.
Есть мнение и об иммунном характере
заболевания. При гипопластических
анеми­ях чаще заболевание прогрессирует,
постепенно поражаются все три ростка
костного мозга, в крови отмечается
панцитопения. Иногда в процесс вовлекается
только один росток, например, при
парциальной (изолированной) красноклеточной
аплазии в костном мозге исчезают только
клетки красного ряда (эритробластофтиз).

Клиническое течение заболевания может
быть острым, подострым и хроническим.
Клинические симптомы зависят от того,
какой росток кроветворения в костном
мозге страдает. При по­ражении
эритропоэза развивается анемия;
лейкопоэза — лейко­пения за счет
гранулоцитопении вплоть до агранулоцитоза,
при­соединяются инфекционные,
септические осложнения; тромбопоэза —
геморрагический синдром (кровоподтеки,
кровотечения и др.). Нет прямой зависимости
между степенью снижения ко­личества
тромбоцитов и появлением геморрагического
синдрома. Иногда геморрагический синдром
появляется при снижении числа тромбоцитов
до 50,0 х 10⁹/л и отсутствует при
меньшем их количестве. При выраженном
геморрагическом синдроме также может
развиться анемия. Селезенка, лимфоузлы
не увеличены. У больных с иммунным
характером болезни может быть увеличена
селезенка. Для подтверждения диагноза
необходимы результаты общего анализа
крови, исследования пунктата костного
мозга и| трепанобиопсии. Наблюдается
нормохромная, реже гиперхромная анемия.
Анизоцитоз и пойкилоцитоз незначительные.
Ретикулоциты отсутствуют. При иммунной
форме болезни может быть небольшой
ретикулоцитоз. Лейкопения с нейтропенией.
Лейко­пения стойкая даже в случае
присоединения вторичной инфек­ции.
Иногда отмечается увеличение числа
эозинофилов. Относительный, иногда
абсолютный лимфоцитоз. У некоторых
больших общее количество лейкоцитов
может быть в пределах нормы за счет
лимфоцитов, которые могут составлять
до 80—90%. Тромбоцитопения с геморрагическим
синдромом. Макроцитоз тромбоцитов.
Тромбоцитопатия (нарушение функциональной
активности тромбоцитов). СОЭ чаще
ускорена до 30—50 мм/ч. Уровень сывороточного
железа в норме или повышен. В костном
мозге резко снижено количество клеток
всех трех ростков кроветворения. В ряде
случаев сохраняются единичные клетки
миелоидного ряда, лимфоциты, увеличивается
количество плазматиче­ских клеток.
Иногда в костном мозге сохраняются
участки с нормальным кроветворением,
и поэтому результаты подсчета пунктата
костного мозга могут не выявить изменений.
Но наличие панцитопении в периферической
крови обязывает к повторной пункции
костного мозга. Результаты трепанобиопсии
показывают, что кроветворный костный
мозг замещен жировым костным мозгом,
т. е. красный костный мозг замещен желтым.
От мечается гнездовое расположение
плазматических, ретикулярных клеток.
Прогноз гипопластических анемий
серьезный, отмечается большой процент
летальности.

Способы определения резус-фактора

Все методы определения резус-фактора
делят на способы, применяемые в клинической
практике, и лабораторные способы.

Способы определения Rh0(d) в клинической практике

В клинических условиях (в приёмном
покое, хирургическом отделении,
операционной), где нет специального
лабораторного оборудования, используют
экспресс-методы определения Rh_o(D)
(D-фактора).

Экспресс-метод определения стандартным
универсальным реагентом в пробирке без
подогрева

Для исследования можно использовать
свежую несвернувшуюся кровь, взятую из
пальца (или вены) непосредственно перед
исследованием, или консервированную
кровь без предварительной обработки,
а также эритроциты из пробирки после
формирования сгустка и отстаивания
сыворотки.

Методика проведения реакции. Исследование
проводят в центрифужных пробирках
объёмом не менее 10 мл. На дно пробирки
вносят одну каплю стандартного
универсального реагента, представляющего
собой антирезусную сыворотку группы
АВ(IV), разведённую 33% раствором декстрана
(ср. мол. масса 50 000-70 000). Затем в неё
добавляют одну каплю исследуемой крови
(или эритроцитов). Круговым вращением
пробирки содержимое размазывают по её
внутренней поверхности таким образом,
чтобы содержимое растеклось по стенкам.
Это значительно ускоряет агглютинацию
и делает её крупнолепестковой. Агглютинация
на стенках пробирки наступает, как
правило, в течение первой минуты, но для
образования устойчивого комплекса
антиген-антитело и чёткой агглютинации
наблюдать следует не менее 3 мин. Затем
для исключения неспецифической агрегации
эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл
физиологического раствора и перемешивают
путём одно-двукратного перевертывания
пробирки (без взбалтывания!).

Трактовка результатов. Наличие
агглютинации (крупные хлопья на фоне
просветлённой жидкости) указывает на
резус-положительную принадлежность
исследуемой крови. Отсутствие агглютинации
(в пробирке гомогенно окрашенная розовая
жидкость) свидетельствует о
резус-отрицательной принадлежности
исследуемой крови.

Лабораторные способы определения резус-фактора

Для определения резус-принадлежности
крови больного в условиях лаборатории
применяют четыре основных метода.

Метод агглютинации в солевой среде

Используют специальные сыворотки,
содержащие полные антитела анти-резус.
Эритроциты в виде 2% взвеси в изотоническом
растворе хлорида натрия соединяют в
пробирках с антирезусной сывороткой.
Пробирки помещают на 1 ч в термостат при
температуре 37 °С, после чего осадок
эритроцитов на дне пробирки рассматривают
с помощью лупы и по его форме учитывают
результат. При положительном результате
(Rh⁺⁾осадок имеет характерный
рисунок в виде нитей или зернистости.
При отрицательном (Rh^—) осадок
размещается равномерным слоем и имеет
вид правильно очерченного круга.

Метод агглютинации в присутствии
желатина

B две пробирки помещают по 0,02-0,03 мл осадка
исследуемых эритроцитов. Затем в первую
пробирку добавляют 2 капли (0,1 мл) 10%
раствора желатина и 2 капли (0,1 мл)
анти-резусной сыворотки, во вторую
(контрольную) пробирку — 2 капли (0,1 мл)
10% раствора желатина и 2 капли (0,1 мл)
физиологического раствора.

Содержимое осторожно перемешивают.
Затем пробирки инкубируют в термостате
при температуре 45-48 °С в течение 30 мин,
после чего добавляют 5-8 мл физиологического
раствора и переворачивают пробирки 1-2
раза для перемешивания.

Результат учитывают, просматривая
пробирки на свет невооружённым глазом
или через лупу. Если эритроциты
резус-положительны, произойдёт их
агглютинация. Отсутствие агглютинации
свидетельствует о том, что испытуемая
кровь резус-отрицательная. B контрольной
пробирке агглютинация эритроцитов
должна отсутствовать.

Непрямой антиглобулиновыи тест
(реакция Кумбса)

Эта реакция наиболее чувствительна для
выявления неполных антител к ауто- и
изоантигенам эритроцитов. К ней, как
правило, прибегают при возникновении
трудностей в определении резус-принадлежности
крови, связанных с нечёткими результатами,
полученными при других методах
исследования. Реакция основана на
использовании антиглобулиновой
сыворотки.

При обработке резус-положительных
эритроцитов неполными антителами
анти-Rh наступает их обволакивание,
сенсибилизация по отношению к
антиглобулиновой сыворотке, которая
агглютинирует сенсибилизированные
эритроциты, поскольку имеет антитела
к глобулинам.

В пробирку вносят антирезусную сыворотку
и отмытые физиологическим раствором
эритроциты, помещают на 1 ч в термостат
при температуре 37 °С, после чего эритроциты
тщательно отмывают. Последующий этап
реакции проводят на плоскости. Каплю
взвеси эритроцитов смешивают с равным
количеством антиглобулиновой сыворотки
и учитывают результат. Наличие агглютинации
— показатель того, что исследуемый
образец крови резус-положительный. Если
агглютинация отсутствует, то испытуемая
кровь резус-отрицательная.

Реакция с анти-D-моноклональными
антителами

На планшете смешивают большую каплю
(0,1 мл) анти-D-моноклональных антител и
маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой
крови.

За реакцией наблюдают в течение 3 мин.
При смешивании анти- D-MKA с образцами
резус-положительных эритроцитов отмечают
быстро наступающую лепестковую
агглютинацию. Если кровь резус-отрицательная,
агглютинация отсутствует.

Соседние файлы в папке Общая хирургия. Петров

• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #

Свою группу крови, так же, как и резус-фактор, должен знать каждый человек. Это необходимо, в первую очередь, для собственной безопасности. Ведь никто из нас не застрахован и неизвестно что может приключиться с нашей жизнью в будущем. Знание группы крови позволит в необходимый и ответственный момент добиться быстрого переливания, которое может спасти жизнь.

Помните о том, что ни один врач не будет совершать инфузию крови без знания ее группы и резуса. Данная процедура может понадобиться в случае, если произошло ДТП, травма или еще какой – то неприятный случай, сопровождающийся повреждением целостности кожных покровов и, вследствие чего произойдет кровотечение.

Очень важно в такие моменты немедленно начать переливание, так как каждая минута здесь на вес золота. Чем скорее начнется процедура, тем вероятнее, что она пройдет без дальнейших осложнений для здоровья человека. Это касается неотложных случаев, но существуют и такие моменты, когда знание группы необходимо не срочно.

Это такие ситуации как: планирование проведения оперативного вмешательства, если вы хотите стать донором крови для кого – то, при наступлении беременности, для постановки на военный учет, при планировании беременности, для определения отцовства.

Во всех этих случаях, а также если вы хотите удовлетворить собственное любопытство необходимо сдавать кровь на определение ее группы и резуса. Существует несколько методов, с помощью которых можно узнать эту информацию. Это определение группы с помощью сывороток или при помощи использования цоликлонов. Последний метод является наиболее популярным, так как имеет несколько преимуществ, именно его мы и рассмотрим.

Что это за метод?

Прежде всего необходимо разобраться, что же представляет собой метод определения группы крови при помощи цоликлонов. И здесь мы сразу же сталкиваемся с новым словом, которое, скорее всего, ранее не слышали.

Цоликлоны, что это такое? Это специальный раствор антител, который связывается на поверхности эритроцитов с антигенами. Таким образом, происходит биохимическая реакция, в ходе которой врачи могут узнавать всю необходимую информацию по поводу группы крови или резус-фактора пациента.

Преимущество метода с цоликлонами в том, что в отличии от такового с сыворотками, с его помощью можно сразу же узнать и резус-фактор.

Стоит сразу отметить, что существует несколько разновидностей цоликлонов:

• анти – А (представлен красной жидкостью);
• анти – В (синяя жидкость);
• анти – D (прозрачная жидкость).

Читайте также: Для чего необходим анализ крови на гемостаз и так ли это важно?

Первые два цоликлона необходимы для определения группы крови. А вот третий, представленный в этом списке помогает определиться с резус-фактором. Данные разновидности цоликлонов выпускаются в небольших прозрачных флаконах, объем которых составляет 5 или 10 миллилитров.

Хранить его можно на протяжении двух лет в темном, недоступном для детей месте. Приобрести такой флакончик можно практически в любой аптеке, при необходимости можно заказать его на складе.

Помните о том, что при определении группы крови и резус – фактора ни в коем случае нельзя смешивать данные цоликлоны. Брать их необходимо разными пипетками, обычно каждый из них продается с отдельной пипеткой. В случае, если вы смешаете цоликлоны, то группа крови будет определена неправильно и вам нужно будет еще раз повторить процедуру.

Как установить группу с помощью анти-А, анти-В и анти-D?

Для того, чтобы узнать группу крови, необходимо прежде всего подготовить все необходимое для этого. Поэтому вам понадобится:

• специальный планшет с семью небольшими лунками;
• три цоликлона: анти – А, анти – В и анти – D;
• три пипетки;
• изотонический раствор натрий хлора;
• шприц для забора крови;
• спирт;
• вата;
• жгут.

1. Начинать процедуру необходимо с забора крови. Обычно используют кровь, взятую из вены. Но в некоторых случаях применяют кровь из пальца. Набрав небольшое количество крови можно приступать к проведению самой процедуры.
2. Проследите за тем, чтобы температура воздуха в помещении, где будет проводиться процедура была не более 25 С. Начинать необходимо с нанесения по одной небольшой капле цоликлонов в лунки планшета.
3. В первую лунку капнуть цоликлон анти – А, во вторую анти – В и в ту, которая располагается сбоку поместить анти – D. Обратите внимание, что каждый вид цоликлона нужно наносить разными пипетками, чтобы они не имели возможности смешаться. В противном случае результаты нельзя считать достоверными и процедуру необходимо будет делать заново.
4. После этого необходимо добавить по одной капле крови к каждому цоликлону и аккуратно смешать две эти жидкости.
5. После этого нужно аккуратно раскачивать планшет на протяжении 3 минут.
6. Результаты можно будет наблюдать уже после 10 – 15 секунд, но для более достоверного результата необходимо подождать 3 минуты. Предварительные результаты можно определять по истечению этого времени. Однако после этого необходимо в каждую лунку добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия и смешать жидкости.
7. После этого нужно на протяжении 3 – 5 минут раскачивать планшетку и уже затем окончательно определять группу и резус – фактор.

Читайте также: Что такое ложноположительный анализ на ВИЧ? Диагностика и причины результата

При определении группы крови и резус-фактора вы сразу же обратите внимание на то, что под тремя ленками, которыми вы будете пользоваться находится еще три таких же. Они необходимы для повторного определения, если оно может понадобиться.

Существует всего 4 группы крови:

• I (0);
• II (А);
• III (В);
• IV (АВ).

После того, как вы смешаете цоликлоны с каплями крови и подождете около трех минут, вам необходимо будет приступать к определению результата. О том, какая группа крови в данном определенном случае будет свидетельствовать произошедшая реакция агглютинации. Это значит, что в определенной лунке эритроциты стали похожими на зернышки небольших размеров. А при добавлении в них изотонического раствора натрий хлора они не изменили свой начальный вид.

Как определить резус-фактор – алгоритм действий

Для определения резус – фактора необходимо выполнить практически те же действия, что и при определении группы крови.

1. Для этого необходимо добавить в третью лунку, находящуюся на планшете одну большую каплю цоликлона анти – Д и каплю.
2. Сюда сразу же добавить каплю крови, которая будет немного поменьше. Также само покачать планшет на протяжении трех минут и приступать к определению результатов.
3. После этого необходимо добавить в лунку каплю изотонического раствора натрий хлора и раскачивать планшетку на протяжении еще 5 минут.
4. После этого можно приступать к окончательному определению резус – фактора.

Стоит отметить, что существует два вида резус – фактора. Положительный и отрицательный, с помощью цоликлонов вы сможете определить, какой именно у вас.

Расшифровка результатов

В таблице представлены значения анализа для разных групп крови.

Достоверность

Метод определения группы крови и резус — фактора при помощи цоликлонов является достоверным и не имеет ошибок. Поэтому ему вы можете абсолютно полностью доверять. Он определит группу крови и резус безошибочно, поэтому применяется во всех странах.

Ошибки возможны лишь в тех случаях, когда вы неправильно выполнили процедуру. Возможно, что вы нарушили последовательность этапов или добавили слишком большое количество цоликлонов, а возможно, наоборот, маленькое. В любом из таких случаев процедура будет считаться неправильной. Вы это увидите тогда, когда примитесь за определение результатов.

Читайте также: Все об анализе крови на стерильность. Как сдать тест в Инвитро и других лабораториях?

Также результаты могут быть неверными не в случае вашей вины. Это может наблюдаться в тех случаях, когда цоликлоны были куплены просроченными. Также возможно, что в данном случае присутствует слабая способность эритроцитов к агглютинации.

Еще одним фактором, который способствует неверному определению относится слишком высокая температура воздуха в помещении, где проводится данная процедура. Помните о том, что она должна быть не более 25 С тепла.

Где сдать анализ и какова цена?

Сдать анализ и определить группу крови и резус – фактор при помощи цоликлоном можно, как в медицинской лаборатории, так и в стационаре отделения или поликлинике.

• В стационаре вам определят кровь по показаниям, если это необходимо.
• В медицинской лаборатории вы сможете сдать анализ на определение группы крови, а также резус – фактора тогда, когда вы этого захотите.

Существует большое количество разных лабораторий, которые занимаются проведением данного рода процедур. Одной из самых популярных медицинских лабораторий, которая занимается определением группы крови и резус – фактора при помощи цоликлонов является Invitro. Здесь у вас всего за несколько минут выполнят забор крови и проведут анализ.

Взятие крови из вены здесь обойдется вам в 575 рублей. Сюда входит взятие крови из вены – 200 рублей и определение группы – 375 рублей. Срок, в течении которого вам передадут результаты составляет всего сутки. Дополнительное определение резус – фактора обойдется вам в 375 рублей.

Помните о том, что знать свою группу крови должен каждый человек, который заботится о своем здоровье. Процедура определения не займет у вас слишком много времени, а ее проведение не требует много усилий. Для того, чтобы процедура была выполнена правильно, достаточно лишь ознакомиться с информацией, изложенной в данной статье.

Такая процедура потребует выполнения несложных последовательных действий, с применением цоликлонов Анти-A, анти-B, анти-D. Для проведения процедуры врачи – лаборанты рекомендуют применять одну определенную фирму сывороток.

Наиболее популярной, которая их производит, является Медиклон. Это одна из самых крупных компаний в России, которые занимаются производством реагентов. Также они занимаются производством всех необходимых дополнительных приспособлений, которые могут понадобиться при определении группы крови.

Регистрационные удостоверения

Определение группы крови по системе AB0 осуществляют в реакции прямой агглютинации с применением цоликлонов анти-A, анти-B, анти-AB, анти-A1 или стандартных гемагглютинирующих сывороток. Непрямой метод типирования основан на взаимодействии стандартных эритроцитов 0(I), A(II), B(III) с антителами α и β в анализируемой сыворотке. Перекрестный метод проводится в обязательном порядке как подтверждение выявления антигенов A и B цоликлонами. Первичное выявление антигена D системы Резус осуществляют с использованием цоликлона Анти-D-Супер (анти-D IgM). Уточняющее исследование, обнаружение частичных вариантов антигена D у доноров, производят с помощью цоликлона Анти-D (анти-D IgG). Материал об открытии групп крови систем AB0 и Резус, методики и техники типирования приведены в статье ниже.

В 1901 году выдающийся ученый Карл Ландштейнер открыл группы крови и заложил основы современной трансфузиологии. Исследователь выявил три группы на основании различных вариантов реакции агглютинации эритроцитов и сывороток крови. Материал для исследования был взят у сотрудников собственной лаборатории. Ученики Ландштейнера Декастелло и Стюрли несколькими годами позже открыли четвертую группу, но посчитали ее сомнительной и исключили из результатов исследований. В 1906 году психиатр из Праги Ян Янский подтвердил существование группы AB (IV). Публикация исследования в местном издании оказалась практически незамеченной. В 1910 году после повторного обнаружения четвертой группы Моссом  Ян Янский был вынужден доказывать первенство открытия. Чешский ученый предложил цифровое обозначение групп крови: I, II, III, IV.

В трансфузиологии группами крови называют различные сочетания антигенов эритроцитов. Антигены являются генетическими признаками: наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении жизни. В 1980 году Международное сообщество переливания крови разработало числовую терминологию для антигенов эритроцитов. Выделены 23 системы группы крови, включающие 194 антигена. Нумерация в большинстве случаев соответствует порядку обнаружения. Входящие в каждую из 23 систем антигены кодируются шестизначным номером: первые три цифры являются номером системы, оставшиеся три – указывают на специфичность антигена внутри системы.

Система группы крови AB0

Определение группы крови по системе AB0 основано на выявлении на поверхности эритроцитов человека группоспецифических антигенов 0, A, B и изоиммунных антител анти-A (α) и анти-B (β) в сыворотке. Уникальная особенность системы AB0 заключается в наличии в плазме человека естественных антител α и β к отсутствующему антигену. Возможны шесть вариантов аллельных антигенов: 00, A0, AA, B0, BB, AB. Фенотипически выделяют четыре группы: 0(I), A(II), B(III), AB(IV) — гетеро- и гомозиготные варианты объединяют (в России используют буквенно-цифровое обозначение).

Групповая принадлежность по системе AB0

• 0(I): антигены A и B отсутствуют, антитела α и β – обнаружены (35 — 40 % населения в мире);
• A(II): присутствует антиген A и антитела β (35 %);
• B(III): обнаружен агглютиноген B и агглютинин α (15 – 20 %);
• AB(IV): наличие агглютиногенов A и B, отсутствие агглютининов α и β (5 – 10 %).

По мере движения с запада на восток Евразии частота обнаружения антигена A падает, а антигена B возрастает. Антиген 0 редко встречается в Азии, но  имеет широкое распространение у коренных народов Южной Америки, Полинезии и Австралии. Причина – эпидемии инфекционных заболеваний.

Результат типирования крови записывают в историю болезни или в карту донора. Врач-трансфузиолог указывает дату и ставит подпись.

В отдельных случаях во время типирования наблюдается слабовыраженная агглютинация эритроцитов. Недостаточно выраженная реакция объясняется наличием слабых вариантов антигенов  A и B. Наибольшее клиническое значение представляют подгруппы A₁ и A₂. Впервые слабые варианты были обнаружены в 1911 году учеными Dungern и Hirszeld. Позднее в 1930 году Landsteiner и Levine предложили названия подгруппы – A₁ и A_2. A₂ встречается до 20 % в группе A и до 35 % в группе AB. Сыворотка лиц из образцов крови A₂ может содержать анти-A₁-антитела: в 2 % случаев в группе A₂ и в 30 % в A₂B. Антитела анти-A₁ представляют опасность ввиду агглютинации эритроцитов группы A.

Методика определения групп крови A₂ и A₂B

Частота выявления эритроцитов A₂ существенно варьируется в зависимости от применяемых реагентов. Приводим сравнение результатов исследования при использовании различных методик типирования групп крови A₂ и A₂B.

• Анти-A₁ (лектин, фитогемагглютинин). Диагностикум явно выраженно (на +++/++++) агглютинирует A₁ эритроциты сразу после смешения с образцом. Не агглютинирует A₂ или вызывает мелкую агглютинацию на пятой минуте и позднее.
• Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки.
• Цоликлоны анти-A и анти-AB.
• Цоликлон анти-A слабый.

Примечание: * — агглютинация выражена слабо, присутствуют мелкие агглютинаты на розовом фоне.

Наибольшую точность исследования обеспечивает Анти-A₁ (лектин, фитогемагглютинин). Тест рекомендован для выявления подгрупп антигена A у детей младше двух лет. Причина – физиологическая незрелость эритроцитов новорожденных, влекущая ошибочные результаты исследования со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.

В 1930 году Landsteiner и Levine обнаружили подтип Aint: промежуточный вариант между A₁ и A₂. Данный антиген характерен для негроидов и достигает 8,5 % у лиц с группой крови A. У европеоидов Aint наблюдался лишь у 1 % людей со второй группой крови. В крайне редких случаях у человека отсутствуют все антигены системы AB0. Фенотип «Бомбей» обусловлен генотипом hh. При отсутствии антигена H у лиц данной категории обнаруживаются анти-A и анти-B антитела.

Методика определения групп крови

Типирование по системе AB0 осуществляют в реакции прямой агглютинации с использованием стандартных гемагглютинирующих сывороток или типирующих реагентов с моноклональными антителами. Применение цоликлонов предпочтительнее ввиду абсолютной специфичности: каждый реагент не содержит примеси других антител, балластных белков и инфекционных факторов.

Алгоритм выявления группы крови гемагглютинирующими сыворотоками

Для определения группы крови AB0 прямым методом используют две серии стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Подготовьте две серии сывороток трех групп с титром 1:32 или выше. Для забора каждой сыворотки используйте отдельную маркированную пипетку. Подготовьте сыворотку AB(IV) для контроля.

1. Обеспечьте хорошее освещение и температуру воздуха 18 – 25 °C.
2. Промаркируйте планшет: 0(I) – слева, A(II) – по центру, B(III) – справа. Вверху по центру укажите фамилию донора или номер анализируемой крови.
3. Нанесите в лунки 1 – 2 капли (приблизительно 0,1 мл) сывороток в два ряда в соответствии с маркировкой планшета.
4. Пипеткой или стеклянной палочкой поместите по одной маленькой капле исследуемых эритроцитов рядом с каплями сыворотки. Объем сыворотки должен примерно в 10 раз превышать объем эритроцитосодержащей жидкости.
5. Перемешайте капли в лунках палочкой.
6. Для ускорения реакции произведите легкое покачивание планшета.
7. Спустя три минуты в лунки планшета, в которых началась агглютинация, добавьте по одной капле NaCl. Подождите еще две минуты.
8. Спустя пять минут оцените результаты реакции в проходящем сете. В случае невыраженной агглютинации добавьте еще по одной капле NaCl.

Результаты реакции:

• Отрицательная реакция в трех лунках свидетельствует об отсутствии антигенов на эритроцитах исследуемого образца. Кровь относится к группе 0(I).
• Агглютинация в лунках с сыворотками 0(I) и B(III) говорит о наличии агглютиногена A и принадлежности к группе A(II).
• Наступление реакции с сыворотками 0(I) и A(II) свидетельствует о присутствии антигена B и групповой принадлежности B(III).
• Результаты реакции во всех лунках указывают на присутствие агглютиногенов A и B и соответствуют четвертой группе AB(IV).

В последнем случае следует удостовериться в отсутствии неспецифической реакции: нанесите на планшет 2 – 3 капли соответствующей группе AB(IV) сыворотки и добавьте одну каплю анализируемых эритроцитов. Перемешайте жидкости и оцените результат спустя пять минут. Отсутствие агглютинации свидетельствует о принадлежности к группе AB(IV), наличие – признак неспецифической реакции. В этом случае, а также при слабовыраженной агглютинации повторите исследование с другими сериями сывороток.

Техника определения группы крови цоликлонами

Моноклональные антитела к антигенам эритроцитов пришли на смену изогемагглютинирующих сывороток. Для каждого типирования достаточно одной серии реагентов анти-A, анти-B, анти-AB. Внедрение моноклональных реагентов позволило значительно упростить и стандартизировать методику типирования по системе AB0. Приводим краткое пошаговое руководство проведения исследования на планшете.

1. Обеспечьте хорошее освещение. Работайте при комнатной температуре воздуха.
2. Объект исследования – эритроцитосодержащие среды.
3. Промаркируйте лунки планшета: анти-A, анти-B, анти-AB или используйте планшет с маркированной наклейкой.
4. Нанесите примерно по 0,1 мл соответствующего моноклонального реагента в каждую из трех подписанных лунок.
5. Добавьте приблизительно по 0,03 мл анализируемых эритроцитов рядом с каждой каплей диагностикума.
6. Смешайте реагент с эритроцитами в лунках отдельными индивидуальными стеклянными палочками.
7. Покачивайте планшет около трех минут.
8. Проверьте наличие агглютинации в лунках.

Обычно реакция обнаруживается уже в первые секунды после смешивания. При этом слабые варианты антигенов A и B могут давать более позднюю агглютинацию.

Непрямой метод типирования: алгоритм действий

Методика определения основана на взаимодействии эритроцитов от предварительно типированных лиц групп 0, A, B или смеси эритроцитов от нескольких одногруппных доноров с изогемагглютининами α и β в исследуемой сыворотке.

При работе с каждым типирующим реагентом используйте сухие чистые пипетки. Промывание палочек для перемешивания и пипеток осуществляйте в 0,9 % растворе NaCl.

• Подготовьте пластину или планшет. Обеспечьте хорошее освещение помещения.
• Выполните забор 3 – 5 мл крови без стабилизатора в пробирку. Дайте сыворотке отстояться 1,5 – 2 часа при комнатной температуре.
• Отмойте тест-эритроциты в 0,9 % физиологическом растворе. Подготовьте 5 % взвесь.
• Промаркируйте секции на планшете: 0(I), A(II), B(III).
• Поместите по 2 капли (приблизительно 0,1 мл) анализируемой плазмы в каждую из трех лунок.
• Добавьте в лунки примерно по 0,03 мл тест-эритроцитов.
• Отдельными палочками смешайте типированные эритроциты с сывороткой.
• Аккуратно покачивайте планшет в течение 5 минут.
• Проведите визуальную оценку результатов реакции агглютинации в проходящем свете.

Заключение о групповой принадлежности

+ — наличие агглютинации, — — отрицательный результат реакции.

• 0(I): реакция в лунках A(II), B(III) (обнаружены антитела α и β).
• A(II): агглютинация с эритроцитами B(III) (выявлены агглютинины β).
• B(III): агглютинация в лунке A(II) (определены агглютинины α).
• AB(IV): отсутствие результатов реакции во всех лунках (антитела в плазме не обнаружены).

Система Резус

Levine и Stetson обнаружили антигены системы Резус в 1939 году. Ученые изучали причины развития гемолитических реакций у рожениц при трансфузиях женщинам идентичных по системам AB0, MN и P. эритроцитов мужей. Годом позже Landsteiner и Wiener продуцировали выработку антител посредством иммунизации кроликов эритроцитами обезьян макака-резус. Антитела получили название анти-RH антитела. Полученные агглютинины вступали в реакцию агглютинации с эритроцитами макак-резус и с эритроцитами 85 % граждан Нью-Йорка белой расы. Вызвавший образование антител антиген получил название RH-фактор (D-фактор).

Система Резус объединяет 45 антигенов. Агглютиногены передаются по наследству и остаются неизменными на протяжении жизни. Иммуногенность убывает в следующем порядке: D > c > E > C > e. Каждый агглютиноген кодируется одним из двух тесно связанных генов: RHD отвечает за выработку D-антигена, RHCE – за продукцию антигенов Cc и Ee. Резус-положительными донорами считают лиц с антигенами D, C или E на поверхности эритроцитов. При отсутствии вышеперечисленных агглютиногенов доноров считают резус-отрицательными.

В редких случаях эритроциты людей не содержат ни одного антигена резус. Фенотип обозначают Rh_null. Ген Xr_o в этом случае представлен в гомозиготной форме и подавляет продуцирование всех антигенов. Обладатели фенотипа Rh_null не проявляют агглютиногеной активности, но имеют возможность передавать антигены по наследству.

Среди европейцев частота резус-положительных по антигену D лиц составляет 85 %. На мембране красных кровяных телец обычно расположено около 10 000 – 30 000 молекул D. При этом существуют два особых типа D-положительных лиц: D^u (слабый) и D^partial (частичный). Иммунная система D^u и D^partial способна вырабатывать анти-D-антитела.

Слабый антиген встречается у 1,5 % резус-положительных лиц и характеризуется низким числом (100 – 500) молекул D на мембране. Является иммуногенным для резус-отрицательных лиц. При этом переливание D-положительных эритроцитов больным со слабым D может вызвать сенсибилизацию кровяных телец донора. Эритроциты с D^u слабо агглютинируются или совсем не вступают в прямую реакцию агглютинации с полными анти-резус антителами. Определение резус-принадлежности производят в непрямом антиглобулиновом тесте. Носителей D^u считают резус-положительными донорами и резус-отрицательными реципиентами.

Частичный D имеет дефицит одного или нескольких эпитопов белковой молекулы. Иммунная система людей с D^partial способна продуцировать антитела к недостающим эпитопам. Среди носителей частичного антигена выделяют семь групп лиц. Наибольшее клиническое значение имеет носительство D^VI (присутствует только эпитоп Z): обладатели данной категории продуцируют антитела к неизмененному антигену и к частичным антигенам D^I – D^V, D^VII. Техника выявления резус-фактора D^VI заключается в последовательном применении двух диагностикумов: моноклональных IgM анти-D-антител (цоликлона Анти-D-Супер или Анти-D IgM) и поликлональных или моноклональных IgG антител анти-D (стандартного универсального реагента или цоликлона Анти-D). Отрицательный результат реакции на первом и положительный результат на втором этапе исследования свидетельствует об обнаружении D^VI. Обычно категории D^VI соответствует генотип CcDee. Беременным женщинам с D^VI при вынашивании плода с полным D назначают антирезусный иммуноглобулин.

Антитела против антигенов резус являются иммунными. Возникают вследствие изосенсибилизации. Специфичность определяется спровоцировавшими образование антител антигенами. Выделяют полные и неполные антитела.

Полные являются IgM антителами. Отличаются большим молекулярным весом, обнаруживаются реже по сравнению с неполными антителами. Способны агглютинировать резус-положительные эритроциты. Имеют меньшее значение при трансфузиях.

Неполные преимущественно относятся к классу IgG. Закрепляются на поверхности резус-положительных эритроцитов без образования агглютинатов. Склеивание кровяных телец осуществляется при наличии коллоидных растворов и протеолитических ферментов или после обработки антиглобулиновой сывороткой. Обладают меньшим в сравнении с полными антителами молекулярным весом. Способны проходить через плаценту. Во время сенсибилизации сперва продуцируются полные антитела, далее в большей мере вырабатываются неполные (иммуноглобулины IgG) антитела.

Свыше 90 % осложнений при гемотрансфузиях обусловлено несовместимостью донора и реципиента по антигену Rho(D). Большое значение также имеет антиген hr’(c). Агглютиноген присутствует у 80 – 82 % населения. Оставшиеся 18 – 20 % лиц попадают в группу повышенного риска ввиду высокой вероятности несовместимости по hr’(c) с донорами и развития посттрансфузионных осложнений.

Техника выявления резус-фактора с использованием цоликлона Анти-D-Супер

Цоликлон Анти-D-Супер — это полные анти-D IgM антитела человека. Для получения достоверных результатов анализируемый образец должен содержать достаточное количество эритроцитов.

1. Обеспечьте хорошее освещение и комнатную температуру воздуха в помещении.
2. Поместите одну большую каплю (приблизительно 0,1 мл) Анти-D IgM на пластину.
3. Рядом расположите одну маленькую каплю (примерно 0,03 мл) исследуемых эритроцитов.
4. Перемешайте две капли стерильной палочкой.
5. Спустя 10 – 15 секунд плавно покачивайте пластинку на протяжении 20 – 30 секунд.
6. Проверьте наличие агглютинации спустя три минуты после перемешивания.

В случае наступления реакции кровь оценивается как резус-положительная (Rh+), при отсутствии реакции – как резус-отрицательная (Rh-). При отрицательной либо слабо выраженной агглютинации необходимо повторно провести исследование с неполными анти-D IgG антителами с целью выявления слабого или частичного антигена D.

Методика определения резус-фактора D^u в пробирочном тесте

Параллельно с анализом выполняют постановку трех контрольных проб: реагента цоликлон Анти-D (анти-D IgG) со стандартными резус-положительными и резус-отрицательными эритроцитами, анализируемых эритроцитов с раствором желатина без диагностикума анти-D IgG.

1. Поместите в пробирку 0,05 – 0,1 мл (одну каплю) эритроцитов из сгустка свернувшейся крови или отмытых от консерванта.
2. Добавьте 0,1 мл (две капли) подогретого до разжижения при 45 – 50 °C 10 % желатина.
3. Добавьте одну каплю цоликлона Анти-D (анти-D IgG).
4. Выполните перемешивание.
5. Инкубируйте пробирку на водяной бане 10 – 15 минут или в термостате при 48 °C на протяжении получаса.
6. Добавьте 5 – 6 мл изотонического раствора.
7. Переверните пробирку 1 – 2 раза.
8. Оцените наличие агглютинации в проходящем свете.

Отсутствие результатов реакции с анти-D IgM и выраженная агглютинация с анти-D IgG свидетельствуют об обнаружении слабых форм антигена D. При слабо выраженной агглютинации следует повторить исследование в непрямой пробе Кумбса.

Определение резус-принадлежности стандартным универсальным реагентом

Стандартный реагент антирезус Rh₀D содержит поликлональные неполные анти-D-антитела. Параллельно с анализом образца осуществляется контрольное исследование реагента Rh₀D со стандартными резус-положительными (одногруппными или группы 0) и резус-отрицательными (одногруппными) эритроцитами.

1. Поместите на дно пробирки одну каплю диагностикума Rh₀D.
2. Добавьте одну каплю анализируемых эритроцитов.
3. Несколько раз встряхните пробирку.
4. Наклоните пробирку практически до горизонтального положения и медленно поворачивайте не менее 3 минут. Растекание содержимого по стенкам обеспечит более выраженный результат реакции. Обычно агглютинация наступает в первые 60 секунд. Запас времени необходим для выявления слабого антигена D^u.
5. Добавьте 2 – 3 мл изотонического раствора NaCl и 2 – 3 раза переверните пробирку без взбалтывания.
6. Визуально оцените наличие агглютинации. Явно выраженные хлопья на фоне прозрачного раствора свидетельствуют о наличии антигена D. Равномерно окрашенная жидкость говорит об отсутствии антигена.

Результат считается достоверным только после проверки контрольных образцов: наступлении реакции со стандартными резус-положительными и отсутствии реакции – с резус-отрицательными эритроцитами.

Информацию о пошаговой постановке непрямого теста Кумбса с использованием неполных анти-D-антител читайте в разделе сайта «Реакция Кумбса».

Список литературы

• Рагимов, А.А. Трансфузионная иммунология/А.А. Рагимов, Н.Г. Дашкова. — М.: Медицинское информационное агентство, 2004. — 279 с.
• Шевченко, Ю.Л. Безопасное переливание крови/Ю.Л. Шевченко, Е.Б. Жибурт. — СПб.: Питер, 2000. — 308 с.

Патенты

Каждая ампула стандартной сыворотки должна иметь паспорт-этикетку с указанием группы крови, номера серии, титра, срока годности, места изготовления. Ампулой з этикетки пользоваться запрещается. Стандартные сыворотки для определения группы крови по системе АВО выпускают с определенной цветовой маркировкой: I(0) — бесцветная, II(А)—голубая, III(В) — красная, IV(АВ) — желтая. Соответствующая цветовая маркировка имеется на этикетке в виде цветных полос: на этикетке сыворотки I(0) полос нет, сыворотки II(А)—две полосы синего цвета, сыворотки III(В)—три полосы красного цвета и сыворотки IV(АВ) — четыре полосы желтого цвета. Сыворотки хранятся при температуре +4 — + 10°С. Сыворотка должна быть светлой и прозрачной, ампула сохранной. Наличие хлопьев, осадка, помутнение являются признаками непригодности сыворотки. Титр сыворотки должен быть не менее 1:32, а активность — высокой: первые признаки агглютинации должны появляться не позднее 30 с. Сыворотки с просроченными сроками хранения к использованию не пригодны.

Тарелку делят цветным карандашом на 4 квадрата и в направлении по часовой стрелке обозначают квадраты I(0), II(А), III(В). В соответствующий квадрат тарелки пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий I(0), II(А), III(В) групп. Подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой-копьем. Первую каплю крови снимают марлевым шариком, последующие разными уголками предметного стекла вносят последовательно в капли сыворотки и тщательно размешивают. Капля вносимой крови должна быть в 5—10 раз меньше капли сыворотки. Затем путем покачивания тарелки тщательно перемешивают кровь с сывороткой. Предварительные результаты оценивают через 3 мин, после чего добавляют каплю изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают путем покачивания тарелки и через 5 мин проводят окончательную оценку реакции агглютинации.

При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зернышки из склеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зерен. Возможны следующие 4 комбинации реакций агглютинации со стандартными сыворотками I(0), II(А), III(В) групп:

Определение групп кови

1. Все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации. Исследуемая кровь I(0) группы.

2. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой II(А) группы обеих серий и положительная с сыворотками I(0) и III(В) групп. Исследуемая кровь II(А) группы.

3. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой III(В) группы в обеих сериях и положительная с сывороткой I(0) и II(А) групп. Исследуемая кровь III(В) группы.

4. Сыворотки I(0), II(А), III(В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит 1У(АВ) группе. Но, прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой IV(АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к IV(АВ) группе. Выявление других комбинаций говорит о неправильном определении групповой принадлежности крови больного.

Сведения о группе крови больного вносят в историю болезни, делают соответствующую отметку на титульном листе за подписью врача, проводившего исследование, с указанием даты исследования.

Ошибки при определении групповой принадлежности крови возможны в ситуациях, когда при фактическом наличии агглютинации она не выявляется или выявляется агглютинация при ее фактическом отсутствии.

Невыявленная агглютинация может быть обусловлена: 1) слабой активностью стандартной сыворотки или низкой агглютинабельностью эритроцитов; 2) избыточным количеством исследуемой крови, добавляемой к стандартной сыворотке; 3) замедленной реакцией агглютинации при высокой температуре окружающей среды.

Чтобы избежать ошибок, необходимо использовать активные, с достаточно высоким титром сыворотки при соотношении объема исследуемой крови и стандартной сыворотки 1:5, 1:10. Исследование проводят при температуре не выше 25 °С, оценивать результаты следует не ранее чем через 5 мин от начала исследования.

Выявление агглютинации при ее фактическом отсутствии может быть обусловлено подсыханием капли сыворотки и образованием «монетных» столбиков эритроцитов или проявлением холодовой агглютинации при проведении исследования при температуре окружающей среды ниже 15 °С. Добавление капли изотонического раствора хлорида натрия к исследуемой крови и сыворотке и проведение исследований при температуре выше 15 °С позволяют избежать указанных ошибок. Ошибки в определении группы крови всегда связаны с нарушением методики исследования, поэтому необходимо тщательное соблюдение всех правил исследования.

Во всех сомнительных случаях необходимо произвести повторное исследование групповой принадлежности со стандартными сыворотками других серий или с помощью стандартных эритроцитов.